Luciana Almeida-Lopes

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A-1

controle	0%	0 + 0	0 + 0
A-2	L1	0%	2 + 1,15	0 + 0
A-3	L2	0%	7,33 + 1,76	1,33 + 0,66
B-1	controle	5%	14 + 3,46	27 + 4,66
B-2	L1	5%	38,66 + 1,76	40,66 + 1,33
B-3	L2	5%	47,33 + 1,33	48,66 + 3,71
C-1	Controle	10%	16 + 2,3	72 + 13,53
C-2	L1	10%	35,33 + 3,71	100,66 + 5,92
C-3	L2	10%	37,00 + 4,72	96,00 + 8,08

SFB = soro fetal bovino

Tabela 5.4: Diferença entre médias do número de células viáveis (x 10³) obtidas nos dias 4 e 6 após a irradiação, pelo teste de Kruskal-Wallis.

		4 dias		6 dias
Figuras	Período Grupo	Diferença entre médias	p < 0,05	Diferença entre médias	p < 0,05
	A1 x A2	6,1667	S	2,0000	NS
	A1 x A3	12,0000	S	5,3333	NS
	A1 x B1	17,6667	S	18,6667	S
	A1 x B2	28,1667	S	30,6667	S
	A1 x B3	38,3333	S	37,3333	S
	A1 x C1	18,1667	S	41,5000	S
	A1 x C2	26,6667	S	46,6667	S
	A1 X C3	28,3333	S	45,6667	S
	A2 x A3	5,8333	NS	3,3333	NS
	A2 x B1	11,5000	S	16,6667	S
	A2 x B2	22,0000	S	28,6667	S
	A2 x B3	32,1667	S	35,3333	S
	A2 x C1	12,0000	S	39,500	S
Figs. 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9	A2 x C2	20,5000	S	44,6667	S
	A2 x C3	22,1667	S	43,6667	S
	A3 x B1	5,6667	NS	13,3333	S
	A3 x B2	16,1667	S	25,3333	S
	A3 x B3	26,3333	S	32,0000	S
	A3 x C1	6,1667	S	36,1667	S
	A3 x C2	14,6667	S	41,3333	S
	A3 x C3	16,3333	S	40,3333	S
	B1 x B2	10,5000	S	12,0000	S
	B1 x B3	20,6667	S	18,6667	S
	B1 x C1	0,5000	NS	22,8333	S
	B1 x C2	9,0000	S	28,0000	S
	B1 x C3	10,6667	NS	27,0000	S
	B2 x B3	8,6667	S	8,000	S
	B2 x C1	10,0000	S	10,8333	S
	B2 x C2	1,5000	NS	16,0000	S
	B2 x C3	0,1667	NS	15,0000	S
	B3 x C1	20,1667	S	4,1667	NS
	B2 x C2	11,6667	S	9,3333	S
	B3 x C3	10,0000	S	8,3333	S
	C1 x C2	21,0000	S	28,6666	S
	C1 x C3	19,3333	S	24,6666	S
	C2 x C3	1,6667	NS	1,0000	NS

As curvas de crescimento referentes aos experimentos realizados com os lasers L1 e L2 estão representadas nas figuras de 5.5 a 5.9, segundo a tabela 5.4.

A figura 5.5 apresenta as curvas de crescimento de células LMF cultivadas em meio DME sem soro fetal bovino. Os cultivos que não receberam irradiação (controles) apresentaram diminuição do número de células viáveis a partir da irradiação, culminando na morte de todas as células aos 4 dias após a primeira irradiação. Quando irradiados pelo laser L1 houve uma manutenção do número de células viáveis até 4 dias após irradiação e morte de todas as células aos 6 dias. O laser L2 produziu um aumento significativo (p = 0,1%) do número de células viáveis atingindo 7,33 x 10³  1,76 células no quarto dia após irradiação, porém aos 6 dias quase a totalidade das células morreram (1,33 x 10³  0,66).



Figura 5.5: Crescimento de células LMF viáveis cultivadas em meio DME sem soro fetal bovino e irradiadas com os lasers L1 e L2.
A figura 5.6 apresenta as curvas de crescimento de células LMF cultivadas em meio DME contendo 5% de soro fetal bovino. Os cultivos não irradiados (controles) apresentaram aumento do número de células viáveis atingindo 27 x 10³ ± 4,66 células aos 6 dias após irradiação. Quando irradiados pelo laser L1 houve um aumento significativo (p = 0,1%) do número de células viáveis em relação ao controle atingindo 40,66 x 10³ ± 1,33 aos 6 dias após irradiação. O laser L2 também produziu aumento significativo (p = 0,1%) do número de células viáveis atingindo 48,66 x 10³ ± 3,71 aos 6 dias. Houve diferença significativa (p = 1%) aos 4 dias e aos 6 dias (p = 1%) entre as curvas de crescimento das culturas irradiadas.



Figura 5.6: Crescimento de células LMF viáveis cultivadas em meio DME contendo 5% de soro fetal bovino e irradiadas com os lasers L1 e L2.

A figura 5.7 apresenta as curvas de crescimento de células LMF cultivadas em meio DME contendo 10% de soro fetal bovino. Os cultivos que não receberam irradiação (controles) apresentaram aumento do número de células viáveis atingindo 72 x 10³ ± 13,53 células aos 6 dias após irradiação. Quando irradiados pelo laser L1 houve um aumento significativo do número de células viáveis em relação ao controle até o quarto dia (35,33 x 10³ ± 3,71) e até o 6° dia (100,66 x 10³ ± 5,92) após a irradiação. A irradiação com o laser L2 também produziu aumento significativo do número de células viáveis em relação ao controle até o quarto dia (37 x 10³ ± 4,72) e até o 6° dia (96 x 10³ ± 8,08) após a irradiação. Os lasers L1 e L2 promoveram praticamente o mesmo crescimento celular não havendo portanto diferença significativa entre as curvas de crescimento das culturas irradiadas.

Figura 5.7: Crescimento de células LMF viáveis cultivadas em meio DME contendo 10% de soro fetal bovino e irradiadas com os lasers L1 e L2.

A figura 5.8 apresenta as curvas de crescimento de células LMF cultivadas em meio DME contendo diferentes concentrações de soro fetal bovino as quais receberam irradiação com o laser L1. Os grupos que estavam em DME sem soro fetal bovino apresentaram manutenção inicial do número de células viáveis até 4 dias após irradiação, e morte entre 4 e 6 dias. Os grupos que estavam em DME com 5% de soro fetal bovino apresentaram aumento linear do número de células viáveis entre o primeiro e o quarto dia e um pequeno decréscimo da taxa de crescimento entre o 4° e o 6° dia após irradiação. Os grupos que estavam em DME com 10% de soro fetal bovino também apresentaram aumento linear do número de células viáveis entre o 1° e o 4° dia e significativo aumento da taxa de crescimento entre o 4° e o 6° dia após irradiação. Até o 4° dia os grupos irradiados com qualquer concentração de soro fetal bovino apresentaram crescimento similar, sendo que os grupos com 5% de SFB atingiram 38,66 x 10³ + 1,76 células e os grupos com 10% de SFB atingiram a quantidade de 35,33 x 10³  3,71 células, não havendo portanto diferença significativa entre estes dois grupos neste período. Entre o 4° e o 6° dia, o primeiro grupo (5%) continuou crescendo atingindo 47,33 x 10³  1,33 células, enquanto que o segundo grupo (10%) atingiu 100,66 x 10³  5,92 células no sexto dia.

Figura 5.8: Crescimento de células LMF viáveis cultivadas em meio DME contendo diferentes concentrações de soro fetal bovino e irradiadas com o laser L1.

A figura 5.9 apresenta as curvas de crescimento de células LMF cultivadas em meio DME contendo as diferentes concentrações de soro fetal bovino as quais receberam irradiação com o laser L2. As curvas de crescimento apresentadas neste gráfico são similares às do gráfico da figura 5.8, exceto pela diferença significativa apresentada no 4° dia entre os grupos com 5% e 10% de SFB.

Figura 5.9: Crescimento de células LMF viáveis cultivadas em meio DME contendo diferentes concentrações de soro fetal bovino e irradiadas com o laser L2.


5.2. Experimento 2
A tabela 5.5 apresenta os números de células viáveis para diferentes tempos dos cultivos de células LMF irradiados com os lasers de  = 692nm (L3) e  = 786nm (L4) e também para os controles não irradiados. Neste caso a potência óptica de saída dos lasers foram iguais, assim como a fluência e a irradiância aplicada sobre as amostras.
Tabela 5.5: Média da contagem celular para os diferentes grupos.

			Nº células x 103 + erro de média
GRUPO	LASER	SFB	2 dias	4 dias	6 dias
A-1	Controle	0%	2,67 + 0,67	0,67 + 0,67	0 + 0
A-2	L3	0%	15,33 + 1,76	8,67 + 2,4	2,67 + 0,67
A-3	L4	0%	8,67 + 1,76	4 + 1,15	1,33 + 0,67
B-1	Controle	5%	4 + 1,15	14,67 + 5,4	22 + 2,31
B-2	L3	5%	26 + 3,46	54 + 2,31	70 + 6,11
B-3	L4	5%	16 + 1,15	40 + 3,46	54,67 + 4,6
C-1	Controle	10%	12,67 + 1,33	27,33 + 2,40	78,67 + 6,36
C-2	L3	10%	27,33 + 0,67	42 + 5,03	88 + 6,11
C-3	L4	10%	22 + 3,46	36 + 4,16	86 + 5,03

SFB = soro fetal bovino

Tabela 5.6: Diferença entre médias do número de células viáveis obtidas nos dias 2, 4 e 6 após a irradiação, pelo teste de Tukey.

		2 dias		4 dias		6 dias
Figuras	Período Grupo	Diferença entre médias	p > 13,2666	Diferença entre médias	p > 13,2666	Diferença entre médias	p > 13,2666
	A1 x A2	12,6667	NS	8,0000	NS	2,6666	NS
	A1 x A3	6,0000	NS	3,3334	NS	1,3333	NS
	A1 x B1	1,3334	NS	14,0000	S	22,0000	S
	A1 x B2	23,3334	S	53,3334	S	70,0000	S
	A1 x B3	12,6667	NS	39,3334	S	54,6666	S
	A1 x C1	10,0000	NS	26,6667	S	78,6666	S
	A1 x C2	24,6667	S	41,3334	S	88,0000	S
	A1 X C3	19,3334	S	35,3334	S	86,0000	S
	A2 x A3	6,6667	NS	4,6666	NS	1,3333	NS
	A2 x B1	11,3333	NS	6,0000	NS	19,3334	S
	A2 x B2	10,6667	NS	45,3334	S	67,3334	S
	A2 x B3	0,0000	NS	31,3334	S	52,0000	S
Figs. 5.10 5.11 5.12 5.13 5.14	A2 x C1	2,6667	NS	18,6667	S	76,0000	S
	A2 x C2	12,0000	NS	33,3334	S	85,3334	S
	A2 x C3	6,6667	NS	27,3334	S	83,3334	S
	A3 x B1	4,6666	NS	10,6666	NS	20,6667	S
	A3 x B2	17,3334	S	50,0000	S	68,6667	S
	A3 x B3	6,6667	NS	36,0000	S	53,3333	S
	A3 x C1	4,0001	NS	23,3333	S	77,3333	S
	A3 x C2	18,6667	S	38,0000	S	86,6667	S
	A3 x C3	13,3334	S*	32,0000	S	84,6667	S
	B1 x B2	22,0000	S	39,3334	S	48,0000	S
	B1 x B3	11,3333	NS	25,3334	S	32,6666	S
	B1 x C1	8,6666	NS	12,6667	NS	56,6666	S
	B1 x C2	23,3333	S	27,3334	S	66,0000	S
	B1 x C3	18,0000	S	21,3334	S	64,0000	S
	B2 x B3	10,6667	NS	14,0000	S	15,3334	S
	B2 x C1	13,3334	S*	26,6667	S	8,6666	NS
	B2 x C2	1,3333	NS	12,0000	NS	18,0000	S
	B2 x C3	4,0000	NS	18,0000	S	16,0000	S
	B3 x C1	2,6667	NS	12,6667	NS	24,0000	S
	B2 x C2	12,0000	NS	2,0000	NS	33,3334	S
	B3 x C3	6,6667	NS	4,0000	NS	31,3334	S
	C1 x C2	14,6667	S	14,6667	S	9,3334	NS
	C1 x C3	9,3334	NS	8,6667	NS	7,3334	NS
	C2 x C3	5,3333	NS	6,0000	NS	2,0000	NS

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