Laboratoriya mashg‘ulotlari

Massaning  o„rtacha  og„irligi.  Tabletkaning  o‗rtacha  massasi  85  mg  ±  5%  bo‗lishi 

kerak (GUF uslubi bo‗yicha, 2.9.5). 

Massaning bir xilliligi. 20 tabletkadan ko‗pi bilan 2 tasini massasi o‗rtacha massadan ± 

7,5 % dan oshgan qiymatga og‗ishi ruxsat etiladi. Lekin bunda birorta xam individual massa 

o‗rtacha massadan 15% ko‗p kattalikga og‗ishi mumkin emas. (GFU,2.9.5) 

Ishqalanish. 1 % dan ko‗p emas (GFU,2.9.7)  

Qo‗shimchalar.  Aniqlash  yuqori  samaradorli  suyuqlik  xromotografiya  usuli  bilan  olib 

boriladi.(GFU,2.2.29) 

Eritmani  ishlatishdan  oldin  tayyorlanadi  va  yorug‗likdan  muxofazalanadi.    Mg  10  ml 

Sinaluvchi eritma. Ezilgan tabletka kukunini 425,0 atsetonitril R da eritiladi,ultratovush bilan 

ishlov berilib, teshiklarini o‗lchamlari 4 mkm bo‗lgan menbranali filtr yordamida filtrlanadi a 

filtrat xajimini ekvivalent suv R xajimi bilan 250×4,0 olib boriladi. 

Solishtirish  uchun  eritma  (a)100,0  mg  SO  (FSO  GFU  yoki  USP  CRS)1% 

propilenglikolda suyultirilgan nitroglitsirin yoki SO (ER SRS) etanoldagi glitsirin trinitrat 1% 

---

185 

 

eritmasi  2  ml xloristovadorod    kislota R  ni  1M eritmasida  eritiladi.  Eritma  suv  xommomida 

100  

0

S xaroratda 30 daqiqa davomida qizdiriladi. 

Solishtirish  uchun  eritma  (v).  1,0  ml  sinalayotgan  eritmani  xarakatlanuvchi  faza 

yordamida  100  mg  gacha  olib  boriladi.  Xromatogrammalash  ultra  binafsha  (UB)  detaktorli 

suyuqlik xromatogrfda quyida keltirilgan sharoitlarda olib boriladi. 

-xromatografiya  R  uchun  oktadetsilsililili  silikagel  bilan  to‗ldirilgan,o‗lchamlari 

250×4,0 bo‗lgan zarrachalari  o‗lchami 5 mkm  yoki  anolog kalonka  Lichrosrner 100 RP-18. 

SHu  kolonka  uchun  ―Xromotografik  ‖  Sistemani  yaroqliligini  tekshirish    test  talablari 

bajariladi 

-xarakatlanuvchi faza tezligi – 1,0ml/min; 

- kolonka xarorati -40

0

S; 

- detekborlash g‗ 210nm to‗liq uzunligida; 

- xarakatlanuvchi faza; atsetonitrilR-suv R(40:60); 

- namuna xajmi – 50mkl 

Xromatografiyalash uchun xar bir eritmadan 50mkl dan foydalaniladi. 

Sinaluvchi  eritma  uchun  xroiatografiyalash  vaqti  asosiy  cho‗qqini  ushlab  qolish 

vaqtidan 3 marta ko‗p bo‗lishi kerak. 

Xromatografiya tizimini yaroqliligini tekshirish. 

Xromatografiya  tizimi  yaroqli  xisoblanishi  uchun  solishtirish  eritmasi  (a)ning 

xromatografiyasida  glitserin  trinitrat  asosiy  cho‗qqilar  aniq  ko‗rinishi  kerak  va  ikkita  bir-

biridan  aniq  ajratilgan  cho‗qqilar  ko‗rinishi  kerak,  bu  cho‗qqilar,  asosiy  glitserin  trinitrat 

ushlab turish vaqti 0,3dan 0,5gacha bo‗lgan dinitratga tegishlidir. 

Sinalayotgan  eritma  xromatografiyasida  xar  qanday  cho‗qqini  maydoni,  asosiydan 

tashqari, nisbiy ushlab  qolish vaqti 0,3dan ko‗p bo‗lmagan, solishtirish eritmasi (v) (1,0%)ni 

xromotogrammasidagi  asosiy  cho‗qqini  maydonidan  katta  bo‗lmasligikerak  va  xamma 

cho‗qqilarni  maydonlarinisummasi,  asosidan  tashqari,  solishtirish  eritmasi  (v)  (3,0%) 

xromotogrammasida asosiy cho‗qqini 3ta maydonidan katta bo‗lmasligi kerak. 

Solishtirish  eritmasi  (v)  (0,1%)ni  xromotogrammasida  maydoni  asosiy  cho‗qqini 

maydonidan 0,1dan kam bo‗lgan cho‗qqilar xisobga olinmaydi. 

Pargalanishi. 

60 sekunddan ko‗p emas (GFU,2.9.1)  

Do‗zalangan birliklarni bir xilliligi. 

Aniqlash to‗g‗ri usul bilan olib boriladi. 

GFU,2.9.40 talablariga asosan/ 

30ta tabletka ajratib olinadi. Ajratib olingan 10ta sini xar birida nitrogritserinnimiqdoriy 

qiymati  quyidagi  usulda  aniqlanadi.  Aniqlash  yuqori  samaradorlik  suyuqlik  xromatografiya 

usuli bilan aniqlanadi (GFU, 2.2.29). 

Eritmalar ishlatish oldidan tayyorlanadi va yorug‗likdan muxofazalanadi. 

Reaktivlar va eritmalar: 

-metanol R2; 

-  xromotografiya uchun suv R; 

-  xarakatlanuvchi  faza:  500ml  xromatografiya  uchun  suv  R  va  500ml  metanol  R2 

aralashtiriladi, aralashmani xona xaroratigacha sovutilib gazsizlantiriladi. 

Sinaluvchi  eritma.  10ml  xajmli  o‗lchamli  kolbaga  1ta  tabletka  solinib,  5ml 

xarakatlanuvchi faza qo‗shiladi, 25minut davomida ultratovush yordamida ishlov beriladi, shu 

erituvchi yordamida xajmni belgigacha olib borib, aralashtiriladi va ―ko‗k lenta‖ qog‗oz filtr 

yordamida  filtrlanadi,  bunda  birinchi  2ml  filtrat  olib  tashlanadi.  Lozim  topilsa  eritma 

shishadan  tyyorlangan  g‗ovakli  filtr  yordamida  yana  filtrlanadi  va  gazsizlantiriladi.  Undan 

so‗ng  ―Miqdoriy  aniqlash‖  bo‗limida  ko‗rsatilgandek  ish  bajariladi:  quyidagi  so‗zlardan 

boshlanib ―Solishtirish eritmasi. 75,0mg SO (FSO GFU yoki VSP/CRS) 1% propilenglikolda 

suyultirilgan  nitroglitserin  yoki  SO  (EP    CRS)  etanoldagi  1%  glitserin  trinitrat  eritmasi‖  va 

―Xisoblash‖ so‗zi bilan yakunlanadi. 

---

186 

 

Bir  dona  tabletkadagi  nitroglitserin  miqdori  X

1

  foizda.  ―Bir  dona  tabletka  tarkibi‖ 

bo‗limda ko‗rsatilgancha nisbatan, quyidagri formula orqali aniqlanadi: 

bu  erda:  

X

2 

=

 

 

            

           

 

        

    

 

S

1

  –  sinaluvchi  eritma  xromatogrammasidan  xisoblangan  nitroglitserin  maydonlarini 

cho‗qqilarini o‗rtacha qiymati; 

S

0

 

–  solishtirish  eritmasini  xromotogrammasidan  xisoblangan  nitroglitserin 

maydonlarini cho‗qqilarini o‗rtacha qiymati; 

M

0

  –  solishtirish  eritmasini  tayyorlash  uchun  olingan  SO  nitroglitserin  massasini 

miqdori, milligrammda; 

a  –  ―Bir  dona  tabletka  tarkibi‖    bo‗limida  ko‗rsatilgan  nitroglitserin  miqdori, 

milligrammda; 

R – SO nitroglitserindagi nitroglitserin miqdori, foizda; 

Mos keluvchi son (AV) quyidagi formula orqali xisoblanadi: 

                  

bu erda: 

X  –  nominal  qiymatiga  nisbatan  bitta  tabletka  tarkibidagi  nitroglitserinni  bittalik 

qiymatini o‗rtacha ko‗rsatkichi ( X

1

, X

2, 

... X

10

), foizda; 

M – tayanch qiymat; 

k – maqbul konstanta; 

s – tanlovda standart og‗ish. 

O‗zgaruvchan sonlarni qiymatlari GFU 2.9.40, jadv.  2.9.40. – 2da keltirilgan. 

Birinchi  10ta  tabletka  uchun  maqbul  son  15dan  kichik  yoki  teng 

            bo‗lishi 

kerak. 

Agarda  ko‗rsatilgan  talab  bajarilmasa,  ya‘ni 

           bo‗lsa,  unda  yuqorida 

ko‗rsatilgandek keyingi 20ta tabletka tekshiriladi va 

   xisoblanadi. 

30ta  tabletka  xisoblangan  yakuniy  maqbul  son  15,0dan  kichik  yoki  teng 

            

bo‗lishi  kerak  va  tabletkadagi  individual  qiymat 

                   dan  kam  emas,     

              dan ko‗p bo‗lmasligi kerak. 

Mikrobiologik soflik 

Tekshiruv GFU, 2.6.13, bo‗lim 5.1.4 lar talablariga asosan olib boriladi. 

1  grammdagi  tirik  aerob  mikroorganizmlarni  umumiy  soni  10

3

  bakteriydan  ko‗p  emas 

va 10

2

 zamburug‗dan ko‗p bo‗lmasligi kerak. 

1g preparatda Escherichia coli mavjud bo‗lmasligi kerak. 

1g dagi bakteriyalarni umumiy sonini aniqlash. 

Ezilgan  tabletkalarni  10g  kukunini  xajmi  250ml  bo‗lgan  sterillangan  flakonga  solinadi 

va natriy xloridli va pepton rn 7,0lik, suyultirish 1:10 (namuna1) bufer eritma yordamida uni 

xajmini 100ml gacha olib boriladi. 

20ml  namuna  1dan  250ml  xajmi  sterillangan  flakonga  solinib,  natriy  xloridli  va  pepton  rn 

7,0lik, suyultirish 1:50(namuna2) fosfatli bufer eritma yordamida  xajmini 100ml gacha olib 

boriladi. 

Namuna  2dan  1ml  dan  ikki  qatlamli  usul  bilan,  soya-  kazein  agarli    2ta  chashka  petriga 

solinadi. 

Inkubatsiya, interpretatsiya  va natijalarni  xisobga olish GFU,2.6.12 talablariga mos  ravishda 

olib boriladi. 

1g dagi zamburug‗larni umumiy sonini aniqlash. 

Namuna  1dan  1ml  dan  2  qatlamli  usul  bilan,  saburo-dekstroz    agarli  2ta  chashka  petriga 

solinadi. 

Inkubatsiya,interpretatsiya  va  natijalarni  xisoblash  GFU,2.6.12  talablariga  mos  ravishda  olib 

boriladi. 

---

187 

 

Escherichia coli 1g dagi miqdorini aniqlash ezilgan tabletkalarni 10g kukunini 500ml xajmli 

sterillangan  flakonga  solinib,  natriy  xloridli  va  pepton  rn  7,0lik  (namuna3)  fosfat  buferlik 

eritma yordamida 200ml gacha xajmi etqaziladi . 

Namuna3  dan  20ml  gacha  soevo-kazeinlik  bulonga  solinib,gomogeniziruyut  va 

inkubatsiyalanadi (suyultirish 1:200). 

Inkubatsiyadan  keyin  idishni  silkitib  aralashtiriladi  va  undagi  eritmani  1ml  ni  100ml  Mak-

Konki buloniga solinib, inkubatsiyalanadi. Agar Mak-Konkini ustiga ekib inkubatsiyalanadi. 

Inkubatsiyani,  interpretatsiya  natijalar  xisobini  GFU,2.6.13  talablariga  mos  ravishda  olib 

boriladi. 

Miqdoriy aniqlash. 

Aniqlashni  yuqori  samarali  suyuqlik  xromotografiyasi  usuli  olib  boriladi  (GFU,  2.2.29) 

eritmani ishlatish oldidan tayyorlanib yorug‗likdan muxofazalanadi. 

Reaktiv va eritmalar. 

-metanol R2 

- xromatografiya uchun suv R 

-  xarakatlanuvchi  faza:  500ml  xromatografiya  uchun  suv  R  va  500ml  metanol  R2 

aralashtiriladi, aralashmani xona xaroratigacha sovutilib, gazsizlantiriladi. 

Sinalayotgan  eritma.  Ezilgan  tabletkalarni  638,0mg  kukuni,  bu  nitrogllitserinni  3,75mg  ga 

ekvivalentdir,xajmi  50ml  bo‗lgan  o‗lchamni  kolbaga  solinadi,  35ml  xarakatlanuvchan  faza 

qo‗shiladi, 25min.davomida ultratovush yordamida ishlov berilib, xajmini shu erituvchi bilan 

belgigacha  olib  boriladi,  aralashtiriladi  va  ―ko‗k  lenta‖  filtr  qog‗ozi  yordamida  filtrlanadi, 

birinchi  5ml  filtratni  chiqazib  yuborgan  xolda.  Lozim  bo‗lgan  xolda  eritma  qo‗shimcha 

shishali  g‗ovakli  filtrdan  o‗tkazilib,  gazsizlantiriladi.  Solishtirish  eritmasi  75,0mg  SO  (FSO  

GFU  yoki  VSP    CRS)  (1%)  propilenglikolda  suyultirilgan  yoki  SO    (ER  SRS)  etanoldagi 

glitsirin trinitrat 1% eritmasini 10 ml xajimdagi o‗lchamli kolbaga solinadi, xarakatlanuvchi 

fazada eritib, shu ertiuvchi yordamida eritma xajimini belgigacha olib borilib aralashtiriladi. 

Xromatografiyalash  suyuqlik  ultrabinafsha  detektorik  xromatograf  quydagi  sharoitda 

bajariladi: 

-  kalonka  Lichrosrner  100  RP-18  o‗lchamlari  250×4,0,  zarrachalarini  o‗lchami  5  mkm  lik 

xromatografiya  uchun  mo‗ljallangan  oktadetsilsilillik  silikogel  R  bilan  to‗ldirilgan  yoki 

shunga  anolog  ―xromatografik  sistemani  yaroqliligini  tekshirish‖  test  talablarini  bajaruvchi 

kalonka 

-xarakatlanuvchi faza tezligi -0,9 ml /min  

-kalonka xarorati – 40 

0

S 

-detektorlash-to‗lqin uzunligi 220 nm  

-namuna xajimi- 20 mkl 

Xromatografiyalash vaqti 15 daqiqa  

Xromatografiya tuzilishini yaroqliligini tekshirish. 

Tuzilishi 

yuqorida 

qayd 

etilgan 

xromatografik 

parametrlarga 

mos 

ravishda 

muvozanatlashtiriladi. 

Muvozanat 

ta‘minlangandan 

so‗ng,solishtirish 

eritmasi 

xromatografiyalanadi  va  3  ta  xromatogrammadan  kam  bo‗lmagan  xolda  cho‗qqilar  maydoni 

yozib olinadi. 

Nisbiy  standart  og‗ish  3%  ortmasligi  kerak,tarelkalar  soni  2000dan  kam  bo‗lmasligi  kerak. 

Simmetriya koeffitsenti 1,2 ga teng bo‗lishi kerak.