1.2.
Genlarni tahrirlash haqida umumiy malumot
Genlarni tahrirlash, tirik organizmning DNK ketma-ketligida juda aniq
o'zgarishlar qilish, uning genetik tuzilishini moslashtirish qobiliyati. Genni
tahrirlash fermentlar, xususan, ma'lum bir DNK ketma-ketligini nishonga olish
uchun ishlab chiqilgan nukleazlar yordamida amalga oshiriladi, bu erda ular DNK
zanjirlariga kesiklar kiritadi, bu esa mavjud DNKni olib tashlash va uning o'rnini
bosuvchi DNKni kiritish imkonini beradi. Genni tahrirlash texnologiyalari orasida
CRISPR-Cas9 nomi bilan tanilgan molekulyar vosita asosiy hisoblanadi, bu kuchli
texnologiya 2012-yilda amerikalik olim Jennifer Doudna, frantsuz olimi
Emmanuel Sharpentier va uning hamkasblari tomonidan kashf etilgan va
amerikalik olim Feng Chjan va uning hamkasblari tomonidan takomillashtirilgan.
CRISPR-Cas9 aniqlik bilan ishladi va tadqiqotchilarga kerakli joylarga DNKni
olib tashlash va kiritish imkonini berdi.
Genlarni tahrirlash vositalarining sezilarli sakrashi odamlarning genetik
muhandisligi bilan bog'liq axloqiy va ijtimoiy ta'sirlar haqidagi uzoq davom etgan
munozaralarga yangi dolzarblikni
keltirib chiqardi. Genetik muhandislik
inson kasalliklarini davolashda yoki
go'zallik yoki aql kabi xususiyatlarni
o'zgartirish uchun ishlatilishi kerakmi
kabi ko'plab savollar o'nlab yillar
davomida u yoki bu shaklda berilgan. Oson va samarali gen tahrirlash
texnologiyalari, xususan CRISPR-Cas9 joriy etilishi bilan bu savollar endi nazariy
bo'lib qoldi va ularga javoblar tibbiyot va jamiyatga juda real ta'sir ko'rsatdi.
Genetik xatolarni tuzatish uchun dastlabki urinishlar
Kasalliklarni davolash yoki xususiyatlarni o'zgartirish uchun gen tahrirlashdan
foydalanish g'oyasi kamida 1950-yillarga va DNKning ikki tomonlama spiral
tuzilishining kashf qilinishiga to'g'ri keladi. 20-asrning o'rtalarida genetik
9
kashfiyotlar davrida tadqiqotchilar DNKdagi asoslar ketma-ketligi (asosan) ota-
onadan naslga sodiqlik bilan o'tishini va ketma-ketlikdagi kichik o'zgarishlar
salomatlik va kasallik o'rtasidagi farqni anglatishi mumkinligini tushunishdi.
Ikkinchisining tan olinishi genetik kasalliklarni keltirib chiqaradigan "molekulyar
xatolar" ni aniqlash bilan bu xatolarni tuzatish vositalari paydo bo'ladi va shu bilan
kasallikning oldini olish yoki qaytarish imkonini beradi degan muqarrar
taxminlarga olib keldi. Bu tushuncha gen terapiyasining asosiy g'oyasi edi va
1980-yillardan boshlab molekulyar genetikada muqaddas g'oya sifatida qaraldi.
Ammo gen terapiyasi uchun gen tahrirlash texnologiyasini ishlab chiqish juda
qiyin bo'ldi. Ko'pgina dastlabki yutuqlar DNKdagi genetik xatolarni tuzatishga
emas, balki genomga kiritilgan yoki ekstraxromosoma birligi (genomdan tashqari)
sifatida saqlanadigan mutatsiyaga uchragan genning funktsional nusxasini taqdim
etish orqali ularning oqibatlarini minimallashtirishga qaratilgan edi. Ushbu
yondashuv ba'zi sharoitlarda samarali bo'lsa-da, u murakkab va cheklangan edi.
Genetik xatolarni chinakamiga tuzatish uchun tadqiqotchilar DNKda inson
genomini tashkil etuvchi uch milliarddan ortiq tayanch juftligida aniq kerakli joyda
ikki zanjirli uzilish hosil qilishlari kerak edi. Yaratilgandan so'ng, ikki qatorli
tanaffus hujayra tomonidan "yomon" ketma-ketlikni "yaxshi" ketma-ketlik bilan
almashtirishga yo'naltirilgan shablon yordamida samarali tarzda tuzatilishi mumkin
edi. Biroq, genomning istalgan joyida va boshqa hech qanday joyda dastlabki
tanaffusni amalga oshirish oson bo'lmadi.
Bundan tashqari Genni tahrirlash - bu olim tirik organizmning DNKsida kichik,
boshqariladigan o'zgarishlarni amalga oshirishi. Ushbu jarayonni tasavvur
qilishning eng oddiy usuli - ulkan qo'lyozmani tahrirlashni tasavvur qilish.
10
Siz o'zgartirmoqchi bo'lgan jumlaga
erishguningizcha yuzlab sahifalarni
aylantirasiz va keyin diqqat bilan
bitta so'zni almashtirasiz. Bu juda
murakkab so'z hujjatida yoki bu
holda genomda faqat kichik
o'zgarishlarni yaratadi.
GMO, genetik jihatdan o'zgartirilgan organizm (yoki ilmiy dunyoda odatda genetik
jihatdan o'zgartirilgan organizm) tirik organizmning DNKsini o'zgartirish
natijasidir. Genlarni tahrirlash ko'p maqsadlarda qo'llaniladi, ulardan biri GMO
yaratishdir.
Biroq, GMO ishlab chiqarish uchun juda ko'p turli xil, boshqa usullar mavjud.
CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats qisqartmasi)
biz genlarni tahrirlash bilan bog'liq holda tez-tez eshitadigan ismdir. CRISPR
genlarni tahrirlashning oddiy usuli yoki vositasidir.
Bugungi kunda genlarni tahrirlash nafaqat AQShda, balki butun dunyoda amalga
oshirilmoqda. Qo'shma Shtatlarda hayvonlarning farovonligini yaxshilash,
mahsuldorlikni oshirish yoki kirishni kamaytirish uchun genlarni tahrirlash
o'simliklar va hayvonlarga nisbatan qo'llaniladi.
Hayvonlarda genlarni tahrirlash bo'yicha davom etayotgan ishlarning misoli
cho'chqalarda. Cho'chqalar cho'chqa reproduktiv va nafas olish sindromi (PRRS)
deb ataladigan infektsiyaga moyil. Agar cho'chqalar guruhida hatto bitta PRRS
holati aniqlansa, har qanday potentsial tarqalishni oldini olish uchun butun
populyatsiyani evtanizatsiya qilish kerak. Genlarni tahrirlash usullari ushbu
kasallikka chidamli cho'chqalarni ishlab chiqarishga muvaffaq bo'ldi, natijada
hayvonlar farovonligi sezilarli darajada yaxshilandi va katta chiqindilarning oldini
oldi.
Genni tahrirlash elementlari federal agentliklar tomonidan nazorat qilinadi.
Qo'shma Shtatlarda odamlarda genlarni tahrirlash amalga oshirilmaydi. Odamlarda
11
genlarni tahrirlash axloqshunoslar va manfaatdor tomonlar tomonidan diqqat bilan
va diqqat bilan muhokama qilingan ko'plab axloqiy tashvishlarni keltirib chiqaradi.
Inson salomatligini yaxshilash uchun gen tahrirlashdan foydalanish imkoniyati
mavjud, bu variant tadqiqotchilar va olimlar tomonidan o'rganilmoqda.
Istalgan joylarda DNKni buzish
CRISPR-Cas9 paydo bo'lishidan oldin, DNKda saytga xos ikki zanjirli uzilishlarni
yaratish uchun ikkita yondashuv qo'llanilgan: biri sink barmoq nukleazalariga
(ZFNs) asoslangan, ikkinchisi esa transkripsiya faollashtiruvchisiga o'xshash
effektor nukleazalarga (TALENs) asoslangan. ZFNlar DNK-bog'lovchi
domenlardan tashkil topgan termoyadroviy oqsillar bo'lib, ular ma'lum uch-to'rt
asosli juft uzunlikdagi ketma-ketliklarni taniydilar va bog'laydilar. To'qqiz tayanch
juftlik maqsadli ketma-ketlikka o'ziga xoslikni berish, masalan, tandemda
birlashtirilgan uchta ZFN domenini talab qiladi. DNK-bog'lovchi domenlarning
kerakli joylashuvi, shuningdek, Fok1 bakterial nukleazasining bir bo'linmasini
kodlaydigan ketma-ketlikka birlashtirilgan. Muayyan joyda ikki ipli kesishni
osonlashtirish uchun ikkita ZFN termoyadroviy oqsilining muhandisligi talab
qilinadi - bittasi maqsadli joyning har ikki tomonida, qarama-qarshi DNK
zanjirlarida bog'lanadi. Ikkala ZFN bog'langanda, Fok1 subbirliklari bir-biriga
yaqin bo'lib, ikkala ipda maqsadli DNKni kesuvchi faol dimer hosil qilish uchun
bir-biriga bog'lanadi.
TALEN termoyadroviy oqsillari maqsadli joyni yonma-yon joylashgan maxsus
DNK ketma-ketligiga bog'lash uchun mo'ljallangan. Ammo sink barmoq
domenlarini ishlatish o'rniga, TALENlar o'simlik patogenlari guruhidagi
oqsillardan olingan DNKni bog'lovchi domenlardan foydalanadilar. Texnik
sabablarga ko'ra TALEN-larni ishlab chiqish ZFN-larga qaraganda osonroq,
ayniqsa uzoqroq tanib olinadigan saytlar uchun. ZFN-larga o'xshab, TALENlar
ishlab chiqilgan DNK-bog'lash hududiga birlashtirilgan Fok1 domenini kodlaydi,
shuning uchun maqsadli joy har ikki tomondan bog'langandan so'ng, dimerlangan
Fok1 yadrosi kerakli DNK joyida ikki zanjirli uzilishni keltirib chiqarishi mumkin.
12
ZFN va TALENlardan farqli o'laroq, CRISPR-Cas9 nukleaza faolligini boshqarish
uchun oqsil-DNK bilan bog'lanish o'rniga RNK-DNK bog'lanishidan foydalanadi,
bu dizaynni soddalashtiradi va maqsadli ketma-ketliklarning keng doirasiga
qo'llash imkonini beradi. CRISPR-Cas9 bakteriyalarning adaptiv immun tizimidan
olingan. CRISPR qisqartmasi ko'pchilik bakterial genomlarda uchraydigan klasterli
muntazam intervalgacha qisqa palindromik takrorlanishlarni bildiradi. Qisqa
palindromik takrorlanishlar orasida bakterial patogenlarning genomlaridan aniq
olingan ketma-ketlik cho'zilgan. "Eski" ajratgichlar klasterning distal uchida,
yaqinda uchraydigan patogenlarni ifodalovchi "yangi" ajratgichlar esa klasterning
proksimal uchiga yaqin joyda joylashgan.
CRISPR hududining transkripsiyasi kichik “yo‘lboshchi RNK”larning ishlab
chiqarilishiga olib keladi, ular palindromik takrorlanishlardan ajratgichlardan
olingan ketma-ketliklar bilan bog‘langan soch turmagi shakllanishini o‘z ichiga
oladi, bu esa har birining o‘ziga mos nishonga biriktirilishiga imkon beradi. Keyin
hosil bo'lgan RNK-DNK heterodupleksi Cas9 deb ataladigan nukleaza bilan
bog'lanadi va uni maqsad-maxsus ketma-ketlik va yo'naltiruvchi RNKdagi
palindromik takrorning tutashuviga yaqin joyda ikki zanjirli DNKning
parchalanishini katalizlashga yo'naltiradi. RNK-DNK heteroduplekslari barqaror
bo'lgani uchun va yagona maqsadli DNK ketma-ketligi bilan bog'langan RNK
ketma-ketligini loyihalash faqat Uotson-Krik asoslarini juftlashtirish qoidalarini
bilishni talab qiladi (adenin timin [yoki RNKdagi urasil] va sitozin bilan
bog'lanadi). guanin), CRISPR-Cas9 tizimi ZFN yoki TALENlardan foydalanish
uchun zarur bo'lgan termoyadroviy oqsil konstruktsiyalaridan afzalroq edi.
13
Do'stlaringiz bilan baham: |