Kafedrasi “biotexnologiya” fanidan o‘quv-uslubiy majmua

3-topshiriq. Genlarni klonlsh jarayoni bosqichlarining ketma – ketlik zanjirini tuzing

Genlarni klonlsh bosqichlari



?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

1. E. coli bakteriyasining DNKsini va shu bakteriya plazmidasini alohida idishlarda EcoRl restriktaza fermenti bilan ishlov beriladi.

2. DNK bo`laklarini elektrofo­rez moslamasida katta kichikligiga qarab ajratiladi.

3. DNK molekulasida EcoRl restrikta­za fermenti taniy oladigan maxsus nukleotidlar izchilligi qancha bo`lsa, shuncha bo`lakka bo`linadi.

4. Ferment plazmidaning halqasimon DNK ko`sh zanjirini fa`at bir joydan kesib, plazmidani «yopishqoq» uchli ochiq holatga o`tkazadi.

5. DNK bo`laklari maxsus bo`yoq bilan bo`yaladi.

6. Rekombinat plazmid hosil kilinadi.

7. Rekombinat plazmidli bakteriyalarda antibiotikka chidamlilik geni bo`lganligi sababli antibiotik ta'sirida o`lmaydi.

8. Ajratib olingan «yopishqoq» uchli DNK bo`lagi ochiq holatdagi «yopishqoq» uchli plazmid DNKsi bilan aralashtirilib ligaza fermenti yordamida tikiladi.

9. Bir xil kattalikdagi DNK bo`laklarini oddiy ko`z bilan ko`rish mumkin.Plazmid tarkibiga xromosoma DNK bo`lagi kiritiladi.

10. Rekombinat plazmid plazmidsiz, ya'ni antibiotik ta'siriga chidamsiz bakteriyaga kiritiladi.

11. Elektroforez gelidan istalgan DNK bo`lagini suvda eritib ajratib olinadi.

12. Yot DNK bo`lagini bu usulda ko`paytirish genlarni klonlash deb ataladi.

13. Klonni tashkil etuvchi har bir bakteriyada yot (geterologik) DNK bo`lagi bor bo`lib, bakteriya biomassasi qanchalik ko`paytirilsa, yot DNK bo`lagi shunchalik ko`payadi.

14. Tajriba o`tkazilayotgan probirkaga an­tibiotik qo`shib rekombinant bakteriya kloni ajratib olinadi va ko`paytiriladi.

3. 
   – topshiriqning javobi: 1; 4; 3; 2; 5; 9; 11; 8; 6; 7; 10; 14; 13; 12.