Исследование параметров процесса термической сушки биомаcсы штамма Cupriavidus eutrophus b 10646

, 
для оп-
ределения чистоты полимера. 
2.5 
Гель–хроматография белков 
 

Гель - хроматографию использовали для разделения водорастворимых 

веществ на высокомолекулярную (белки) и низкомолекулярную фракции, а 
также для разделения водорастворимых белков на отдельные фракции [17].
Для разделения водорастворимых веществ использовали сефадекс G-
150. Колонку 35 × 1,5 см заполняли сефадексом и за 2 - 3 ч перед работой пе-
реносили в холодную комнату. Водный экстракт предварительно концентри-
ровали до содержания 20 мг/мл и переносили в колонку. В работе использова-

---

49 
лась колонка диаметром 2 см и высотой 30 см. Объем наносимого образца не 
более 1 - 2 % объема колонки. 
Скорость протекания элюента составляла 0,3 мл/мин. Контроль за вы-
ходом белковых фракций осуществлялся спектофотометрически при длине 
волны 280 нм на приборе СФ-26. Сбор фракций проводили с использованием 
автоматического фракционного коллектора FCC 60. 
Представлена схема определения физико – химических свойств полимера 
Рисунок 12 - Определение физико – химических свойств полимера
Нерастворенный клеточный материал отделяется путем нагревания ва-
куумного фильтра и охлаждения полученного горячего раствора, в результа-
те чего получится полиэфирный гель. Однако, осадители, такие как вода, 
этанол, метанол, ацетон или их смеси, также могут быть добавлены в рас-
твор, после чего полиэфир осаждают в виде кристаллов. Полиэфиры, от-
фильтрованные с помощью вакуумной фильтарции, дополнительно можно 
освободить от жидкости и осадить путем перемешивания остатка с осадите-
лями, такими как вода, этанол, метанол, ацетон или их смеси.
Хроматография с 
хромато-масс
спектрометром 
Определение мо-
лекулярно –
массовых 
характеристик 
Определение 
температурных 
характеристик 
Подготовка проб, 
метанолиз 
Подготовка проб 
2 мл полимера 
2 мл хлороформа 
фильтрование 
Дифференциаль-
но - сканирую-
щая колоримет-
рия 
Гель-
проникающая 
хроматография 
Определение 
чистоты
полимера 

---

50 
Кристаллический осадок отфильтровывают и сушат. Поскольку все без 
исключения экстрагенты имеют высокие температуры кипения по сравнению 
с осадителями, они могут быть выделены из осадителей, например, путем 
дистилляции, соответственно, осадители и экстрагенты можно использовать 
вторично для экстракции и осаждения полиэфиров[35]. 
Таким образом, в первом этапе этанолом из высушенной измельченной 
биомассы удаляли липиды и жирные кислоты (Т 55-60°С) и фильтровали, на 
втором – экстрагировали полимер дихлорметаном (1:4). Осаждение произво-
дили гексаном (1:2). Полученный полимер высушивали при комнатной тем-
пературе и взвешивали.
Показателем эффективности сушки служила остаточная влажность 
биомассы.
Количество веществ, извлекаемых этанолом, определяли путём отбора 
аликвоты в количестве 10 мл и высушиванием в выпарных чашках. Выход 
экстрактивных веществ, извлекаемых этанолом (в процентах от сухой био-
массы) рассчитывали по формуле. 
Молекулярную массу полимера определяли с использованием системы 
гель - проникающей хроматографии Agilent 1200 с набором полистироловых 
стандартов (Sigma, США). Находили значение средне - весовой, среднечи-
словой молекулярной массы и полидисперсности (Мв, Мч, ПД); температур-
ные характеристики – методом дифференциально - сканирующей калоримет-
рии на приборе DSC 1 (Mettler Tolledo, Швейцария).
Эксперименты проведены в трех аналитических повторностях. Мате-
матическую обработку экспериментальных данных проводили стандартными 
методами; определяли средние значения результатов; рассчитывали откло-
нения от среднего значения для каждого результата; дисперсию, стандартное 
отклонение отдельного результата и стандартное отклонение среднего ре-
зультата. Проверку надежности полученных результатов определяли по кри-
терию Стьюдента при избранной доверительной вероятности α = 0,95. Пол у-

---

51 
ченные результаты проверяли по одному из вышеописанных способов (по 
критериям максимального отклонения, Стьюдента) на наличие грубых оши-
бок. После исключения грубых ошибок производили повторную обработку 
результатов [50]. Для решения поставленных задач использовали программу 
MS Office 
Excel 2007 с встроенным пакетом анализа данных.