Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 
ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ 
СУБСТАНЦИИ ПРЕПАРАТА ЛХС-1269 МЕТОДОМ 
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ 
ХРОМАТОГРАФИИ
Козин Д.А., лаб.-иссл., асп.
1,2
, Миронова М.В., лаб.-иссл.
1
1
Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. 
Н.Н. Блохина,
2
Первый Московский государственный медицинский университет им. 
И. М. Сеченова,
Москва, Россия
Научные руководители: Шпрах З.С. к.фарм.н., в.н.с.
1,2
, Будько А.П., н.с.
1
, 
Гусев Д.В. к.х.н., в.н.с.
1
, Решетняк В.Ю., д.фарм.н., проф.
2
Синтезированное в лаборатории химического синтеза НМИЦ 
онкологии им. Н.Н. Блохина производное индоло[2,3-а]карбазо-
ла ЛХС-1269 является перспективным соединением, проявляющем 
противоопухолевую активность. Одним из важных этапов для даль-
нейшего внедрения нового препарата в медицинскую практику яв-
ляется валидация разработанной методики определения действую-
щего вещества в фармацевтической субстанции.
Определение проводили с применением жидкостного хро-
матографа Agilent 1200, оснащенного колонкой Zorbax SB-С18,
3,5 мкм, 150х3 мм и диодно-матричным детектором. Элюентом А 
служила смесь ацетонитрила и 0,1% раствора трифторуксусной 
кислоты (ТФУ) в воде (1:9). В качестве элюента В применяли смесь 
ацетонитрила и 0,1% раствора ТФУ в воде в соотношении (9,5:0,5). 
Элюирование проводили в течение 7 мин в градиентном режиме:
0 мин — 100% А, 6,4 мин — 100% В) при скорости подачи 0,5 мл/мин. 
Валидацию методики проводили в соответствии с требованиями 
Государственной фармакопеи (ГФ) по параметрам специфичность, 
линейность, сходимость, промежуточная прецизионность, пра-
вильность и пределы обнаружения. Для статистической обработки 
полученных данных использовали программу Microsoft Exсel.

---

668
ФАРМАКОЛОГИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ, ФАРМАЦЕВТИКА, ТОКСИКОЛОГИЯ
По итогам валидации доказано, что растворители и подвижная 
фаза, применяемые в методике, не создают помех для детектора и 
не влияют на точность результатов. В диапазоне 80-120% от рабочей 
концентрации выявлена линейная зависимость площади пика дей-
ствующего вещества от его концентрации в растворе, описываемая 
уравнением у=49,229х-35,512. Коэффициент корреляции — 0,999. 
Коэффициент вариации составил 0,64%, что менее 1,5%, и свиде-
тельствует сходимости методики анализа в условиях повторяемости. 
Критерий Стьюдента t(P,f), вычисленный из двух выборок, составил 
1,69, что меньше табличного t(95%, 16)=2,12, что подтверждает отсут-
ствие систематической ошибки определения промежуточной преци-
зионности. Разработанная методика может считаться правильной, 
поскольку среднее значение результатов в трипликатах находится в 
диапазоне 98,0%-102,0%, относительная погрешность среднего ре-
зультата измерений — 0,70% (1,00%), а значение t(P,f)=1,15 меньше 
табличного значения t(95%, 8)=2,31. Вычисленные пределы обнару-
жения и количественного определения составили 3,15 мкг/мл и 9,57 
мкг/мл, соответственно.
Поскольку полученные в ходе валидации результаты не отягоще-
ны систематическими ошибками и соответствуют критериям, реко-
мендуемым ГФ, разработанная методика может считаться валидной.

---

ФАРМАКОЛОГИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ, ФАРМАЦЕВТИКА, ТОКСИКОЛОГИЯ
669