ОЦЕНКА ИНТЕРНАЛИЗАЦИИ СИНТЕТИЧЕСКИХ
АНАЛОГОВ ПРОЛИН-БОГАТЫХ ПЕПТИДОВ,
МЕЧЕННЫХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ КРАСИТЕЛЕМ,
В ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ
IN VITRO
Довбыш О.В., студ., Андреева Е.А., асп.,
Филатенкова Т.А., н.с., Комлев А.С., м.н.с.
Институт экспериментальной медицины,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Шамова О.В., д.б.н., доц.
Повышение эффективности противораковой химиотерапии яв-
ляется одной из актуальных задач современной биологии и меди-
цины. Решением этой проблемы может быть создание средств тар-
гетной доставки лекарственных препаратов в опухолевые клетки на
основе природных пролин-богатых пептидов врожденного иммуни-
тета, которые способны самостоятельно и в конъюгате с каким-либо
«грузом» проникать через мембраны клеток, не оказывая цитотокси-
ческого действия.
Целью
работы является исследование интернализации структур-
ных аналогов бактенецинов домашней козы Capra hircus в опухоле-
вые клетки
in vitro
. В качестве объектов исследования использова-
лись химически синтезированные пептиды — различные аналоги
бактенецинов — ChBac3.4-1, ChBac3.4-2, miniChBac7.5а, ChBac5-1.
Для возможности визуализации проникновения пептидов во
внутриклеточное пространство, молекулы были помечены флуо-
ресцентным красителем BODIPY FL (Thermo Fisher Scientific, USA).
Очистка конъюгатов осуществлялась методом обращенно-фазовой
высокоэффективной жидкостной хроматографии на установке Gold
System (Beckman Coulter, USA). С помощью электрофореза в кис-
лой буферной среде в присутствии мочевины была оценена степень
чистоты конъюгата и показана его отличная от исходных пептидов
подвижность. Масс-спектрометрический анализ показал совпадение
расчетных и экспериментальных молекулярных масс, а также была
подтверждена чистота полученных конъюгатов.
570
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
Качественная оценка интернализации пептидов в опухолевые
клетки линии K-562 осуществлялась с помощью флуоресцентного
микроскопа EVOS FLoid (Thermo Fisher Scientific, USA). Установлено,
что меченые пептиды в концентрациях 0,2 мкМ и выше при совмест-
ном инкубировании с клетками более 15 минут при 37°C накаплива-
ются в цитозоле, не оказывая при этом цитотоксического действия.
В качестве маркера клеточной гибели использовался иодид пропи-
дия.
Количественная оценка интернализации пептидов в опухолевые
клетки осуществлялась методом проточной цитометрии на установ-
ке Navios (Beckman Coulter, USA). Было обнаружено, что при тех же
условиях меченые пептиды проникают в мишени, при этом жизне-
способность клеток не опускалась ниже 94%.
Полученные данные подтверждают предположение о возможно-
сти использования исследуемых пептидов как основы для создания
средств таргетной доставки лекарственных препаратов в малигнизи-
рованные клетки. На следующем этапе работы будут получены до-
полнительные данные о распределении меченых пептидов в опухоле-
вых клетках
in vitro
методом конфокальной микроскопии.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
571
Do'stlaringiz bilan baham: |