Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ВНЕКЛЕТОЧНЫХ 
НАНОВЕЗИКУЛ, СПЕЦИФИЧЕСКИХ ДЛЯ ТОЛСТОЙ 
КИШКИ, КАК НОВАЯ ПЕРСПЕКТИВНАЯ МЕТОДИКА 
ДИАГНОСТИКИ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА
Назарова И.В., Слюсаренко М.А., Сидина Е.И., 
Никифорова Н.С. 
Национальный медицинский исследовательский центр 
онкологии имени Н.Н. Петрова,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Малек А.В. к.м.н.
Введение. 
Колоректальный рак (КРР) является одной из веду-
щих причин смертности от рака,что связано с низкой эффективно-
стью методов ранней диагностики. Жидкая биопсия, основанная на 
идентификации внеклеточных нановезикул (ВНВ) в плазме, пред-
ставляется перспективной диагностической технологией. Совре-
менные подходы к диагностике рака на основе ВНВ предполагают 
либо количественную оценку опухолевых ВНВ, либо обнаружение 
опухоль-ассоциированных компонентов (например, микроРНК) 
в общей популяции плазменных ВНВ. Первый подход не обладает 
специфичностью из-за отсутствия подтверждённых везикулярных 
маркеров КРР. Второй подход недостаточно чувствителен из-за 
чрезвычайно гетерогенного состава ВНВ в плазме.
Гипотеза:
развитие хорошо дифференцированной аденокарци-
номы эпителия толстой кишки должно приводить к увеличению 
высвобождения ВНВ, несущих маркеры кишечной дифференциров-
ки.Такие ВНВ могут оказаться перспективными диагностическими 
маркерами КРР.
Методы и материалы.
Потенциальные маркеры был выбра-
ны на основе преимущественной их экспрессии в эпителии тол-
стой кишки, их мембранной локализации и экспрессии в составе 
ВНВ.В исследовании были использованы образцы плазмы крови 
больных КРР (n=48) и здоровых доноров (ЗД) (n=50). Общая по-
пуляция ВНВ была выделена из плазмы с использованием двух-
фазной полимерной системы и проанализирована с точки зрения 

---

ОНКОЛОГИЯ, ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ И ИХ БИОМЕДИЦИНСКИЕ ОСНОВЫ
439
размера,концентрации,морфологии и поверхностных маркеров 
с помощью NTA, Крио-ЭМ и проточной цитометрии. Для выделе-
ния тканеспецифических ВНВ использовали суперпарамагнитные 
частицы (СПМЧ), покрытые стрептавидином, и биотинилирован-
ные антитела к CLRN3, GPA33, GCNT3, PIGY, REG4 и другим десяти 
потенциальным маркерам. Эффективность иммуносорбции таких 
экзосом к СПМЧ оценивали методом проточной цитометрии после 
мечения антителами к CD63 и/или CD9.
Результаты. 
Мы отобрали 16 потенциальных маркеров и оце-
нили количество ВНВ, положительных по этим маркерам, в плазме 
крови пациентов с КРР и здоровых доноров. Количество ВНВ, несу-
щих CLRN3, GPA33, GCNT3, PIGY и REG4, различалось между груп-
пами пациентов и доноров,разница была статистически значимой.
Величина AUC варьировала от 0,6 до 0,81. Мультиплексный анализ 
позволил как увеличить наблюдаемую разницу между сравнивае-
мыми группами (КРР против ЗД), так и достичь AUC = 0,72.
Выводы.
Представленное исследование является первой по-
пыткой изучения колон-специфических ВНВ как диагностических 
маркеров рака, возникающего из эпителия толстой кишки. Наши 
результаты подтвердили исходную гипотезу и показали эффектив-
ность подхода. 

---

440
ОНКОЛОГИЯ, ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ И ИХ БИОМЕДИЦИНСКИЕ ОСНОВЫ