|
2. Nukleotidlar va nuklein kislotalarning metabolizmining klinik jihatlari.
Transkriptomiya quyidagilarga asoslanadi. oqsillarni kodlovchi barcha matritsali RNKlarni aniqlash; har bir alohida mRNK miqdorini aniqlash:. oqsillarni kodlovchi barcha genlarning ekspression shakllarini aniqlash. Transkriptomika patologiyaning genomikasi asosidir, uning usullari molekulyar genetik diagnostikaga imkon beradi. Inson genomini batafsil o'rganish genlardagi mutatsiyalarni, masalan, onkologik, yurak-qon tomir, diabet, metabolik sindrom, shizofreniya kabi turli xil kasalliklarning paydo bo'lishiga olib keladigan kasalliklarni aniqlashga imkon beradi. Molekulyar laboratoriya diagnostikasida ayrim kasalliklarga olib keladigan mutatsiyalarni aniqlash usullari qo'llaniladi. irsiy yoki ortib ketish ehtimoli Ushbu usullar PCR va o'ziga xos patologiyalarga olib keladigan buzilishlarni o'z ichiga olgan marker genlaridan foydalanishga asoslangan.Inson tanasida nukleotid metabolizmining buzilishi (2-bobga qarang) turli xil patologiyalarga olib keladi. Nukleotidlarning metabolik parchalanishi natijasida hosil bo'lgan erkin purin va pirimidin asoslarining ta'siri ayniqsa muhimdir. Ushbu erkin asoslarning muhim qismi keyinchalik parchalanmaydi, ammo purin nukleotidlarini sintezi uchun ishlatiladi. Bu holda Sntenning metabolizm yo'li 2-bobda muhokama qilinganidan sodda, qisqaroq va energetik jihatdan qulayroqdir. Erkin Xushnin guanin fosforiboziltransferaza fermenti ishtirokida qayta tiklanadi. gipoksantin yashil, keyin transkriptsiya B hujayralarida kuchliroq (normal). Agar qizil va yashil teng bo'lsa, siz sariq rangga ega bo'lasiz. Shunday qilib, ushbu genning transkripsiya darajasini turli to'qimalar va organlarda, biologik suyuqliklarda normal va patologik sharoitlarda, terapiya oldidan va operatsiyadan oldin, operatsiyadan oldin va keyin solishtirish mumkin. Ko'pincha "genomika", "transkriptomika" va "proteomika" atamalari bir xil ma'noda - MPNA sintezi darajasida ham, oqsil sintezi darajasida ham ma'lum majoziy ma'noga ega barcha genlarning ekspression tahlilini bildirish uchun ishlatiladi (2-bobga qarang). Har bir kasallik o'ziga xos xususiyatlari, ushbu kasallik uchun xos bo'lgan genlar to'plamining transkripsiya darajalarining o'ziga xos xususiyati bilan ajralib turishi aniqlandi. Oddiy va patologik namunalarning transkriptomlarini taqqoslash quyidagilarga imkon beradi:. xromosoma lokalizatsiyasi aniq ma'lum bo'lgan yangi marker genlarini aniqlash; vaqt o'tishi bilan marker genlari darajasidagi o'zgarishlarni kuzatib borish; patologning dinamikasini kuzatish; davolash samaradorligini kuzatish va uning natijasini taxmin qilish. Zamonaviy darajada transkrittomalar kompyuter yordamida namunalarni aniqlash yordamida tahlil qilinadi,
1. RNK hujayralarini nazorat namunasining A hujayralariga ajratish 2. RNK namunasini nusxalash - cdna 5. Nazorat namunasining mikrochipida bo'yalgan nuqtalarni taqsimlash 3. Namunani yorliqlash 4. Mikrochipda duragaylash Har bir nuqta - bitta gen shakl. 4.8. Transkrintomni aniqlash bosqichlarining ketma-ketligi Agar berilgan sharoitlarda ba'zi bir nuqtalar ma'lum genlar bilan duragaylanmasa, demak, bu gen transkripsiyalanmagan. Agar mikrochipning ma'lum bir nuqtasi lyuminestsentsiya (rangli) bo'lsa, demak bu mikrochinning oligonukleotidlari lyuminestsent yorlig'i bilan cDNA nusxasi bilan duragaylangan va shuning uchun gen transkripsiyalangan. Olingan natijaning xato ekanligini yoki yo'qligini aniqlash uchun ikkita namuna - A va B o'rtasida taqqoslash o'tkaziladi (4.8-rasmga qarang). Buning uchun biosay A namunasini (patologiya) oling, undan umumiy RNK oling va bioassay molekulalarining teskari transkripsiyasidan so'ng olingan barcha cDNA molekulalarini lyuminestsent yorlig'i (masalan, qizil). Xuddi shu protsedura B (normal) nazorat namunasi bilan amalga oshiriladi, ammo cDNA molekulalari boshqa rang bilan etiketlanadi (masalan, yashil). Keyin DNK mikroarrayining duragaylanishi ikki tinch cDNA preparatlari aralashmasi bilan amalga oshiriladi. Raqobatbardosh duragaylash amalga oshiriladi, duragaylar birinchi navbatda molekulalari ko'p bo'lgan teskari yo'nalishda bo'ladi. Agar chipning ma'lum bir nuqtasida signal qizil bo'lsa, demak, bu genning transkripsiyasi A hujayralarida (patologiya) B hujayralariga qaraganda kuchliroq (normal). Agar signal bo'lsa ko'pgina mRNK molekulalari ushbu molekulalarning o'z-o'zidan parchalanishi mumkinligini ko'rsatadigan funktsional guruhlarga ega. MikroRNKlar, bir-birini to'ldiruvchi mintaqalarga ega bo'lgan markerlar, ushbu markerlarni taniydilar va fermentlarni mRNK molekulasiga yo'naltiradi va bu molekulaning degradatsiyasiga olib keladi. RNomics yordamida namunalar tarkibidagi mikroRNKlar aniqlanadi va ularning konsentratsiyasi aniqlanadi. To'qimalardagi turli xil mikroRNKlarning kontsentratsiyasining o'zgarishi turli xil patologiyalarni ko'rsatadi, bu klinik RNomikada ushbu patologiyalarni aniqlashda qo'llaniladi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
