Gen regulyatsiyasi molekulyar mexanizmlari. Transformatsiya va transduksiya. Mundarija: Kirish

Har birining ijobiy va salbiy tomonlari.
Elektroporatsiya kimyoviy transformatsiyaga qaraganda unchalik og'ir emas va odatda transformatsiyaning yuqori samaradorligini beradi (DNK mikrogramiga hosil bo'lgan koloniyalarda o'lchanadi). Biroq, bu qimmatroq. Bu zaryadni etkazib beradigan maxsus apparatni va zaryadni hujayra suspenziyasiga o'tkazish uchun kyuvetalarni talab qiladi. Elektroporatsiya tuzga sezgir - agar kyuvetaga ortiqcha tuz tashilsa, siz qimmatbaho namunalarni yo'qotishingiz mumkin. Shaxsan men kimyoviy o'zgarishni afzal ko'raman. Taxminan yarim soat ko'proq vaqt talab qilinsa-da, men natijalarni oldindan bashorat qilish mumkin, deb o'ylayman va agar konsentratsiyasi juda past bo'lsa, DNKning katta hajmini qo'shish menga yoqadi. Siz eritmaga juda ko'p tuz qo'shilishi xavfi tufayli elektroportatsiya yordamida DNK hajmini oshira olmaysiz. Garchi kimyoviy o'zgarishlarning kamchiliklari uning samaradorligi past bo'lsa-da, endi siz Stratagene ’s XL10-gold kabi o'ta vakolatli hujayralarni sotib olishingiz mumkin, shuning uchun bu endi muammo emas.

DNK transformatsiyasi nima

Plazmid yoki vektor konvertatsiyasi - bu ekzogen DNKni hujayra hujayrasiga o'tkazish jarayoni. Transformatsiya odatda DNKning bakterial, xamirturushli yoki o'simlik hujayralariga kirishini anglatadi, transfeksiya esa odatda sutemizuvchilar hujayralari uchun ajratilgan. Odatda DNK konstruktsiyasini mezbon hujayraga aylantirish usuli kimyoviy transformatsiya, elektroporatsiya yoki zarracha bombardimonidir. Kimyoviy transformatsiyada hujayralar kaltsiy xlorid kabi ikki valentli kationlar bilan ishlov berish orqali vakolatli (ekzogen DNKni o'zlashtira oladigan) bo'lib, bakteriyalar hujayra devorini DNK o'tkazuvchanligini oshiradi. Issiqlik zarbasi hujayra membranasida vaqtincha teshiklarni hosil qilish uchun ishlatiladi, bu esa ekzogen DNKni hujayraga o'tkazishga imkon beradi. Elektroporatsiyada bakteriyalar hujayrasini vaqtincha o'tkazuvchan qilish uchun qisqa elektr impuls ishlatiladi. Zarrachalarni bombardimon qilish odatda o'simlik hujayralarini o'zgartirish uchun ishlatiladi. Oltin yoki volfram zarralari DNK konstruktsiyasi bilan qoplangan va jismonan gen tabancasi bilan hujayraga majburan kiritilgan.