«fizika va kimyo» kafedrasi hayvonlar biokimyosi

a
- kalibrlangan grafikdan topilgan tajriba namunasidagi kreatin miqdori, 
mg; 
10
- to‘qima gomogenatining hajmi; 
100
- foiz hisoblash koeffitsienti; 
2
-
aniqlash uchun olingan filtrat hajmi; C - muskul to‘qimasining og‘irligi, mg. 
 
64- tajriba
. 
Muskul to’qimasida adenozintrifosfatazaning
aktivligini aniqlash
 
 
Mg
2+
- ATF aza fermenti ATF ning gidrolitik parchalanishini katalizlaydi va 
bu reaksiya natijasida energiya ajralib chiqadi:
ATF+ ATFAZA + 
H
2
O
, ADF+ 
Rn+ 10 kkal/mol‘. Bu ferment aktivligi to‘qimalarda sarflagan ATF ning miqdorini 
ko‘rsatadi. 
Metodning printsipi. Fermentativ reaksiyaning aktivligi, ATF aza ta‘sirida 
ATF ning parchalanishidan hosil bo‘lgan anorganik fosfat kislotaning miqdoriga 
qarab aniqlanadi. 
Kerakli asbob
:
gomogenizator, analitik tarozi, qaychi, 1va 2 ml li pipetkalar, 
probirkalar bilan shtativ, voronkalar, filtr qog‘oz, termostat, spektrofotometr, 
sentrafuga. 

---

 
Reaktivlar:
 
Muskul to‘qimasi, 0,25 M saxarozaning eritmasi, Trixlorsirka 
kislotasining 20% li eritmasi, magniy sulfatning 0,05 M eritmasi, ATF 0,02 M 
eritmasi( 10 ml suvda 0,1102g ATF- 
Na 
eritiladi), 0,1 n 
NaOH
eritmasi, 0,1n 
glitsin eritmasi, bufer aralashma
pH
–7,4( 0,1n glitsin eritmasi 
NaOH
bilan 
pH
–
7,4gacha olib kelinadi), 5n H
2
SO
4
eritmasi, askorbat kislotaning yangi 
tayyorlangan 0,4% eritmasi. 
Ishning borishi
:
100 mg muskul to‘qimasi maydalanadi va 5ml 0,025 M 
saxarozaning Tris-
HCl
eritmasi bilan gomogenizatsiya qilinadi. Hosil bo‘lgan 
gomogenat doka orqali filtrlanadi Ikkita probirka 2ml dan gomogenat solinadi. 
Birinchi probirka nazorat namunasi hisoblanib, unga 1ml 20% li trixlorsirka kislota 
eritmasida qo‘shiladi. Shundan keyin ikkala probirkaga 2ml dan inkubatsion 
aralashma qo‘shiladi va 30 minut 
37 ˚C 
da termostatga – inkubatsiyaga qo‘yiladi. 
Inkubatsiya davri tugagach tajriba namunasi 1ml 20% li sirka kislotaning 
eritmasidan qo‘shiladi. So‘ngra probirkalardagi suyuqlikning hajmi 0,25 M 
saxarozaning eritmasi bilan 10 ml ga etkaziladi, hamda 10 minut 2500 ayl/min 
tezlikda tsentrafuga qilinadi. Cho‘kma to‘kib yuboriladi, suyuqlik qismi bilan esa 
rangli reaksiya olib boriladi. 
Buning uchun 1ml tsentrafugatdan olib, unga 2ml ammoniy molibdat 
eritmasidan, 1ml askorbin kislotasining mis sulfatdagi eritmasi va 6 ml atsetat 
buferidan qo‘shiladi. Eritmalar aralashtirilgach, 30 minutga qoldiriladi. Shundan 
keyin hosil bo‘lgan rangning intensivligi spektrofotometrda 750 nm to‘lqin 
uzunligida o‘lchanadi. 
ATFaza fermentining aktivligi mikro mol miqdori bilan belgilanadi va bu 
1g to‘qima tarkibidagi ferment 1 minutda qancha ATF ni parchalay olishini 
ko‘rsatadi. ATFaza fermentining aktivligi quyidagicha hisoblanadi: