|
Framitsetin sulfat miqdoriy tarkibini aniqlash
Tekshirishlarni korxona usuliga mos keluvchi agarda diffuziya usulida aniqlaniladi.
Framatsidin sulfatni takribini namunadagi dori vositasida aniqlaniladi: 5 ml namunani mos
keluvchi erituvchi bilaneritib 100 mg/ml framitsitin eritmasi olinadi, va qaytiiriladi.
Tahlil:
Agarda diffuziya usulida tekshiriliarni olib boriladi.
Kichik plastinalar usuli.
Dozalar nisbati 4:1.
Muhit:
1) Ushlab turuvchi muhit (Maintenance medium): A IP96 muhiti
2) Spora olish uchun muhit (Spore suspension medium): A IP96 muhiti
3) Faolligini aniqlash uchun muhit (Assay medium) :Oziqaviy agar ning rN kattaligi
sterilizatsiyadan so‘ng 8,0±0,1.
Bufer eritmasi: 0,1 M fosfat buferi, rN 8,0.
Tayerlanishi:
16,73 g ikki o‘rinni bosuvchi kaliy fosfat
0,523 g bir o‘rinni bosuvchi kaliy fosfat
Yuqorida ko‘rsatilgan miqdordagilarni eritiladi va eritmaning hajmni 1000 ml gacha
distillangan suv bilan etkaziladi. Eritmani rN kattaligini fosfor kislotasi yoki 10N kaliy gidroksid
bilan aniqlashadi (rN kattaligi sterilizatsiyadan so‘ng 8,0±0,1).
Mikroorganizm – testini tayyorlash.
Sterilligini tekshirish uchun qattiq yopiilgan prbirkalarni inkubirlanadi, 24 soat davomida
muhitni saqlanadi. Har bir probirkaga petli kosachasiga vegetativ organizmini engil sim orqali
inokulyat ekiladi. Inkubatsiya jarayoni probirkalarda 16 soat mobaynida 37°S haroratda , so‘ng
boshlang‘ich 4°S haroratda saqlanadi. Tarkibiy qatlamini Rouks bankasiga 250 ml muhit A ni 0,3
g/l magniy sulfat bilan inokulyasiya qilinadi.
Rouks bankasini inkubirlanishi 7 kun mobaynida 37°S haroratda olib boriladi. Agar sirtini
100 steril tozalangan suv bilan shishali dumaloqchalarni yordamchi suspenziya sifatida ishlatilib
yuviladi. Buning natijasida suspenziyaga yig‘iladi.
Boshlang‘ich suspenziyani suv hammomida 30 daqiqa mobaynida 60°S haroratda qizdiriladi
va 4°S haroratda saqlanadi. Bu jarayonni 3 kun mobaynida qaytiriladi. Bu suspenziya 3 oy
davomida ishlatiladi. Ishlatishdan oldin boshlang‘ich suspenziyani 60% darajasida suvni
o‘taqazishigcha suyultirilib 580 nm to‘lqin uzunligida mos bo‘gan kalorimetrda tekshiriladi.
Framitsitin sulfat standarti (har yildagi tayyorlanish:)
Framitsit sulfatga mos bo‘lgan miqdorda 10 g (10 g atrofida) Noecht Marin Roussel dan olib
kelingan, partiyadan tanlab olinib, tashqi standart sifatida belgilanadi.
Tashqi standart standartlashda Noecht Marin RousselReference standartini ishlatib, tashqi
standart sifatida belgilanadi.
Boshlang‘iya standart eritmasi:
aniq tortma olinadi va framitsit sulfatga mos bo‘lgan miqdorda (tashqi standart) steril
tozalangan suvda shunday eritiladi 1000mg / ml boshlang‘ich eritmasi standart eritmasiga o‘xshab
belgilanishi kerak bo‘ladi.
Framitsitin sulfat standartining ishchi eritmasi (har haftadagi tayyorlanish:)
10 ml standart eritmasni mos bo‘lgan bufer eritmasi bilan rN=8,0 bo‘lgan, 50 ml o‘lchov
kolbasida (200 mg/ml) eritiladi.
232
Framitsitin sulfat standartieritmasini yuqori va past konsentratsiyasi (har kundagi
tayyorlanish:)
2,5 ml (200 mg/ml) standart eritmasini fosfat buferi bilan rN=8,0 bo‘lgan, 25 ml o‘lchov
kolbasida (20 mg/ml) eritiladi. (SN)
2,5 ml (200 mg/ml) standart eritmasini fosfat buferi bilan rN=8,0 bo‘lgan, 100 ml o‘lchov
kolbasida (5 mg/ml) eritiladi. (SL)
Framitsitin sulfat ishchi standartining 20 mg/ml va 5 mg/ml konsentratsiyali eritmalarini
ishchi doza uchun miqdoriy tahlilda ishlatiladi. Faollikni aniqlash uchun dozar nisbati 4:1.
Tekshirilayotgan eritmani tayyorlash.
Tekshirilayotgan eritma namunasining ekstraktini 0,1M fosfat buferida suyultirilib, rN=8,0
bo‘lgan 20 mg/ml konsentratsiyasi olinadi. Olingan eritmani yuqori konsentratsiyali ishchi eritma
sifatida ishlatiladi. (TN) So‘ng yana tekshirilayotgan eritma namunasining ekstraktini 0,1M fosfat
buferida suyultirilib, rN=8,0 bo‘lgan 5 mg/ml konsentratsiyasi olinadi.Olingan eritmani past
konsentratsiyali ishchi eritma sifatida ishlatiladi. (TL)
Sterillangan Petli likopchasini (tashqi diametri 9 sm bo‘lgan) avtoklavda 20 daqiqa
mobaynida 121°S haroratda ishlov beriladi.
Muhit eritiladi 60°S gacha sovutiladi va 13 ml muhitni har bir plastinkagalarga taqsimlanadi.
Har bir namuna uchun minimal 4 ta plastina ishlatiladi. Qatlam asosni qotishini kutiladi. Qlogan
muhitni 60 °S haroratda ushlab turilib 1% li B. Subtilis ATSS 6633 suspenziyaga ekiladi.
Aylanma holatda yaxshilab arlashtiriladi va 4 mldan ikkinchi qatlamga inokulyasiyalangan
muhitni solinadi, asosiy qatlamni bir xil taqlash kerak bo‘ladi. Muhitni quyuqlashini kuzatiladi.
Plastinkada bir hil masofada taqsimlab o‘lchami 8 mm misli probkalar orqali 4 ta
chuqurchalar hosil qilinadi va agar muhitidan kesib olingan bo‘laklar yo‘qotiladi.
50 mkl standart yuqori va past konsentratsiyali eritmadan bir biridan diagonal joylashgan
chuqurchalarga solib qo‘yiladi.
50 mkl standart yuqori va past konsentratsiyali eritmadan qolgan ikki chuqurchalarga solib
qo‘yiladi. Buning natijasida, standart va ishchi eritmalar turli xil chuqurchalarda bitta plastinkada
joylashadi. Plastinkalarni xona haroratida 60 daqiqa qo‘yib qo‘yiladi, so‘ng 18 soat mobaynida
37°S haroratda inkubirlanadi va inkubatsiyalangan muhitni diametrini antibiotiklarni muhitini
chegarasini o‘lchovchi asbob orqali hisoblab topiladi. Natijalarni kompyuter orqali to‘g‘rilanadi va
tekshiriluvchi namunaning faolligini foizlarda hisoblab topiladi.
Hisoblash:
% Faolligi =Antilog 2 ± a log I
bu erda:
)
(
SL
SH
TL
TH
SL
SH
TL
TH
a
I =
doza nisbati = SH:SL
100
%
Тахлил
Фаоллик
foiz tarkibini aniqlanishi
Saqlanish muhiti (A IP 96 muhiti:)
Pepton
6,0 g
Pankreatik kazein sho‘rvasi
4.0g
Achitqi ekstrakti
3.0 g
Go‘sht ekstrakti
1,5 g
Dekstroza
1,0 g
Agar
15.0g
Distillangan suv
1000 ml
Sterilizatsiya qilingandan
so‘ng pH kattaligi:
6.55 ±0,05
Spora olish uchun muhit (A IP 96 muhiti:)
233
Saqlanish muhiti (A IP 96 muhiti:)
Pepton
6,0 g
Pankreatik kazein sho‘rvasi
4.0g
Achitqi ekstrakti
3.0 g
Go‘sht ekstrakti
1,5 g
Dekstroza
1,0 g
Marganets sulfat
300 mg
Agar
15.0g
Tozalangan suv
1000 ml
Sterilizatsiya qilingandan
so‘ng pH kattaligi:
6.55 ±0,05
Anitibiotik foallini aniqlash uchun muhiti (A IP 96 muhiti:)
Pepton
6,0 g
Achitqi ekstrakti
3.0 g
Go‘sht ekstrakti
1,5 g
Natriy xlorid
5,0 g
Agar
15.0g
Distillangan suv
1000 ml
Sterilizatsiya qilingandan
so‘ng pH kattaligi:
8,0 ±0,1
Do'stlaringiz bilan baham: |
