Bioorganik kimyo

14 – ISH. IMMUNOGLOBULIN XROMATOGRAFIYA BO’YICHA TOZALASH.

Ishning umumiy izohi. Qon zardobidan ammoniy sulfat bilan cho’ktirilgan immunoglrbulinlar fraktsiyasi ion almashuvchi DYeAYe-tsellyulozada (yoki sefedeksda) ion almashish xromatografiyasiga qo’yiladi. Alfa va beta globulinlarni ajratish maqsadida ion almashgich bilan ion kuchi 0,02 M natriy fosfat buferi va pH 8,0 bo’lganda bog’lanmaydigan Ig C yig’iladi va to’yishish darajasi 50% bo’lganda cho’ktiriladi.

Jihozlar va reaktivlar. Kolonka (d=2 sm, N=20 sm xromotografiya yig’masidan) tsentrifuga, SF-26, pH 8 ga teng bo’lgan 0,2 M natriy-fosfat buferi, 200 ml tagi yassi kolba – 2 dona, ammoniy sulfat.

Ishning borishi. Qon zardobidan ammoniy sulfat bilan 50% gacha to’yintirib (1-ish, v). globulinlar yig’indisi cho’ktirilganda cho’kmada alfa, beta va gamma – globulinlar bo’ladi. Immunokimyoda immunoglobulinlarni kimyoviy tajribalar uchun yuqori darajada tozalash talab qilinadi. Bu uslub alfa va beta globulinlarni DYeAYe tsellyulozada bog’lanish xossalariga asoslangan, chunki bu sharoitda (0,02 M bufer, pH 8,0) Ig C sorbent bilan bog’lana olmaydi. Kolonkaga 1/5 hajmda ishchi bufer qo’yiladi va voronkali tomoniga paxta filtr (qaynatilgan meditsina paxtasi), tepasiga yumaloq qilib qirqilgan filtr qog’oz qo’yiladi va bu filtr vaqtincha shisha tayoqcha bilan ushlab turiladi. Gel suspenziyasi asta-sekin qo’zg’atib yubormasdan kolonkaga qo’yiladi. 30 minutdan so’ng gel cho’kkandan keyin tayoqcha olinadi va kolonkaga 1-2 hajm ishchi bufer qo’yilib muvozanatga keltiriladi. Balandligi 2x10 sm gel bilan to’ldirilgan kolonkaga 200 mg gacha Ig C fraktsiyasi (20 ml kontsentratsiyasi 10 mg/ml) solinadi. Hamma hajmdagi fraktsiya o’tkazilgandan so’ng kolonkani (1-4 hajmdagi gel) yutilishi 280-nm-da yo’qolguncha ishchi bufer bilan yuviladi. Kolonkadan o’tgan hamma fraktsiya yig’ilib, hajmi o’lchanadi va 50% to’yinguncha (31,3 g/100 ml) (NH₄)₂SO₄ qo’shiladi.