Bioorganik kimyo

ODAM QON ZARDOBI ALBUMINI VA OVALBUMINNI

DKAK-TSYELLYULOZADA QON ALMASHINISH XROMATOGRAFIYASI BILAN TOZALASH.

Ishning umumiy izohi. Odam qoni zardobi albuminining (OZA) va tuxum albuminining (OV) tozalanmagan namunasi pH 7 bo’lgan 20 mM natriy fosfat buferida DYeAYe-sellyuloza anionalmashgichda ion almashish xromatografiyasiga qo’yiladi. Albuminlar kolonkadan 0,05:0,1: 0,3 va 0,6 M NaC1 bilan bosqichma-bosqich elyuatsiya qilinib, so’ngra dializ qilinadi va liofillar quritiladi.

Jihozlar va reaktivlar. Kolonka (2x20 sm), polietilen yoki rezinadan yasalgan d=0,1-0,2 sm, uzunligi 1-2 m bo’lgan birlashtiruvchi paychalar, DYeAYe ni tsyuloza (sefadeks) –20-40 ml bo’ktirilgan gel. pH 7,4 bo’lgan natriy fosfat buferi, SF-26, 300 ml tagi yassi kolbalar 4 dona, 1 l kolba –1 dona, dializ trubkalari, OZA-200 mg, OV –200 mg.

Ishning borishi. Kolonkaa yuvilgan, regeneratsiya (qayta tozalangan) qilinib o’z holatiga anion almashgich ishlash uchun tayyorlangan bufer bilan birga to’ldiriladi (namlash usuli bilan, gelda pufakchalar hosil bo’lishidan holi holda) va tutashtiruvchi naychalar yordamida 100 mg oqsil/10 ml gel hisobida oqsil eritmasi solinadi, kolonkani 5 barobar hajmdagi 20 mM natriy fosfat buferi bilan yuviladi. Gel bilan bog’langan oqsillar ketma-ket 0,05; 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl tutuvchi buferda elyutsiya qilinadi. Elyutsiya har bir bufer bilan elyuatning A3 4 0 ni nolga teng kelguncha olib boriladi. 0,05 M NaCl dagi elyuat tashlab yuboriladi, 0,1; 0,3 va 0,6 M NaCl dagi alyuatlar dializlanib tarkibini ifodalash uchun foydalaniladi, OZA (SACH) va OV asosan 0,3 M NaCl bilan elyutsiya qilinib, 2 marotaba 1-2 soatda 20 mM natriy fosfat buferi va bir marotaba suv bilan dializ qilinadi. Dializat liofil holatda quritiladi va oqsilni keyingi ifodasi uchun foydalaniladi.

Eslatma. Xromotografik kolonka tayyorlash uchun ko’rgazma: ion-almashinish, affin va gel filtratsion xromatografiya uchun standart kolonkalar yo’q bo’lsa, laboratoriyada tayyorlangan shisha kolonkalardan foydalanish mumkin. Kerakli o’lchamdagi kolonkaga tagidan birlashtiruvchi naycha ulanib taxminan 1/5 hajmda ishchi bufer qo’yiladi va naycha berkitiladi. Kolonkaning voronkali quyi qismiga qaynatilgan paxta filtr, uning tepasidan unga mos keladigan filtr vaqtincha shisha tayoqcha bilan ushlab turiladi, uncha quyuq bo’lmagan gel suspenziyasini asta-sekin qo’zg’atib yubormasdan kolonkaga qo’yiladi. 15-30 minutdan so’ng gel filtrga cho’kkandan keyin shisha tayoqcha olinadi va kolonkaning pastki naycha qismi ochiladi. Agarda kolonkadagi gelning miqdori kambo’lsa, suspenziya gel cho’kishi bilan yana qo’shiladi. Kolonkaning yuqori qismiga (elyuant qo’yish uchun) probka yordamida rezina yoki polietilen naycha ulanadi. Ish jarayonida gel ustunining qurib qolishiga yo’l qo’yish mumkin emas.