Биокимё кафедраси

кетма кетлиги 
2 soat 
20 soat 
ВаmН
I 
С
GGATCC
G 
8 
10 
25 
CG
GGATCC
CG 
10 
>90 
>90 
CGC
GGATCC
CGC 
12 
>90 
>90 
Bgl
II 
C
AGATCT
G 
8 
0 
0 
GA
AGATCT
TC 
10 
75 
>90 
GGA
AGATCT
TCC 
12 
25 
>90 
Cla
I 
C
ATCGAT
T 
8 
0 
0 
G
ATCGAT
C 
8 
0 
0 
CC
A
TCGAT
GG 
10 
>90 
>90 
CCC
ATCGAT
GGG 
12 
50 
50 
EcoR
I 
G
GAATTC
C 
8 
>90 
>90 
CG
GAATTC
CG 
10 
>90 
>90 
CC
GGAATTCC
GG 
12 
>90 
>90 
Hind
III 
C
AAGCTT
G 
8 
0 
0 
CC
AAGCTT
GG 
10 
0 
0 
ССС
AAGCTT
GGG 
12 
10 
75 
Nhe
I 
G
GCTAGC
C 
8 
0 
0 
CG
GCTAGC
CG 
10 
10 
25 
CTA
GCTAGC
TAG 
12 
10 
50 
Pst
I 
G
CTGCAG
C 
8 
0 
0 
TGCA
CTGCAG
TGCA 14 
10 
10 
Pvu
I 
C
CGATCG
G 
8 
0 
0 
AT
CGATCG
AT 
10 
10 
25 
TCG
CGATCG
CGA 
12 
0 
10 
Sac
I 
C
GAGCTC
G 
8 
10 
10 
Sac
II 
G
CCGCGG
C 
8 
0 
0 
TCC
CCGCGG
GGA 
12 
50 
>90 
Sma
I 
CCCGGG 
6 
10 
10 
C
CCCGGG
G 
8 
10 
10 
CC
CCCGGG
GG 
10 
0 
50 
TCC
CCCGGG
GGA 
12 
0 
>90 
Spe
I 
G
ACTAGT
C 
8 
10 
>90 
GG
ACTAGT
CC 
10 
10 
>90 
CGG
ACTAGT
CCG 
12 
0 
50 
CTAG
ACTAGT
CT 
AG 
14 
0 
50 
Sph
I 
G
GCATGC
C 
8 
0 
0 
CAT
GCATGC
ATG 
12 
0 
25 

---

25 
ACAT
GCA
TGC
ATGT 14 
10 
50 
Xba
I 
C
TCTAGA
G 
8 
0 
0 
GC
TCTAGA
GC 
10 
>90 
>90 
TGC
TCTAGA
GCA 
12 
75 
>90 
CTAG
TCTAGA
CTAG 14 
75 
>90 
Xho
I 
C
CTCGAG
G 
8 
0 
0 
CC
CTCGAG
GG 
10 
10 
25 
Изоҳ: Қалин курсив билан рестирикция сайтлардаги кетма кетлик кўрсатилган. 
[18]. 
Лигазалар.
1961 йили Мезельсон ва Вейгл фаг бир мисолида 
рекомбинациянинг моҳияти ДНК молекулаларининг кесилиши ва 
кейинчалик бирлашишидан иборатлигини кўрсатганлар. Бу ДНК ва РНК 
фрагментларини тикилишида қатнашадиган ферментларни топишга сабаб 
бўлган. 1967 йили бундай фермент топилган ва улар ДНК-лигазалар деб 
номланган. Бу фермент нуклеин кислотанинг 2 занжирли молекуласидаги 
фосфодиэфир боғни катализлайди. Бошқача айтганда, ДНК-лигазалар ѐнма-
ѐн жойлашган нуклеотидлар аро боғ ҳосил қилиб бирлаштиради. ДНК-
лигазалар ДНК репарацияси жараѐнларида, репликацияда жуда керакдир. 
ДНК-лигазалар кофакторга бўлган зарурияти ва таъсир қилиш 
хусусиятига қараб 2 типга ажратилади: 
1.
 
E.coli
нинг 
ДНК-лигазаси 
кофактор 
сифатида 
дифосфопиридиннуклеотид,
2.
 
Т4- фагининг лигазаси эса Mg
2+ 
иштирокида АТФ ни ишлатади[5]. 
Ген мухандистлигида Т4-фагидан олинган лигазалар кўп 
ишлатилади. 
Қайтар транскриптаза 
РНК асосида ДНК ни ҳосил қилиш бўлиб, м-
РНКни ДНКнинг комплементар занжирига транскрипциялаш учун 
ишлатилади. Геноми бир занжирли РНК молекулаларидан иборат бўлган 
ретровируслар ўрганилганда ретровирус ички ҳужайравий ривожланиши 
жараѐнида ҳужайра ҳўжайин хромосомасига 2 занжирли ДНК кўринишида ўз 
геномининг интеграция босқичини босиб ўтиши аниқланган. 1964 йили 
Темин РНК-матрицада комплементар ДНКни синтезловчи фермент 

---

26 
борлигини аниқлаган. Ушбу РНКга боғлиқ 
ДНК-полимераза
қайтар 
транскриптаза ѐки ревертаза деб номланган. 
Қайтар транскриптаза реакциясини РНК фаолликка эга бўлган кучли 
ингибиторлардан фойдаланган ҳолда махсус шароитларда олиб борилади. 
Бунда РНК молекулаларининг тўлиқ ҳажмли ДНК-нусхалари олинади. 
Праймер сифатида поли (А)-тутувчи мРНК нинг қайтар транскрипциясида
олигo (dT), 3'-поли (А) учига эга бўлмаган РНК молекулалари учун эса 
кимѐвий синтезланган олигонуклеотидлар ишлатилади. мРНКда ДНКнинг 
комплементар занжири синтезлангандан ва РНК бузилгандан кейин
ДНКнинг 2 занжири синтезланади.
Матрица сифатида кДНКнинг биринчи занжири бўлиши мумкин. Бу 
реакция ревертаза сингари
E.Coli 
нинг ДНК-полимеразаси ѐрдамида 
катализланиши мумкин. Синтез тугагандан сўнг кДНКнинг 1- ва 2-
занжирлари шпилька тугуни билан ковалент боғланган ҳолда қолади. Бу 
тугун эндонуклеаза S1 билан парчаланади. Ҳосил бўлган икки занжирли 
ДНКни клонланланаѐтган векторларга киритиш, ДНКнинг гибрид 
молекулалари таркибида кўпайтириш ва кейинги тадқиқотларда ишлатиш 
мумкин. 
Маълумки, тирик организм ҳужайраларида ферментлар биологик 
катализаторлар сифатида муҳим аҳамиятга эга ҳисобланади. Ҳозирги кунда 
ҳужайраларда функция бажарувчи асосий ферментларнинг структуравий ва 
функционал фаоллик механизмлари етарлича даражада ўрганилган. 
Жумладан, ДНК молекуласи рестрикцион – модификация жараѐни амалга 
ошишида иштирок этувчи рестрикцион эндонуклеаза (рестриктаза) ферменти 
структура тузилиши ва функцияси ҳақида етарлича даражада батафсил 
маълумотлар йиғилган. Ҳозирги вақтда рестриктаза ферменти биотехнология 
жараѐнларда илмий тадқиқотларда ва шунингдек амалий жиҳатдан муҳим 
ҳисобланган ферментлардан бири ҳисобланади (7-расм). 

---

27