4-bosqich 404-guruh talabasi Jo’raqulov Durbekning Biologiyada fizik-kimyoviy tadqiqot usullari fanidan

. Gel xromatografiyada ajratib olinishi kerak bo’lgan modda xususiyatidan kelib chiqqan holda, sefadeksni turli ko’rinishlaridan foydalaniladi (Masalan: G100, G200 va x.k.). Quyida achitqilarda keng tarqalgan invertaza fermenti gel-filtratsiyasi bilan tanishamiz. Ma’lum darajada tozalangan invertaza tarkibli supernatantni gel-filtratsiyasi uchun 2.5x60 sm xajmli G-100 sefadeksi bilan to’ldirilgan kolonka tanlab olinadi. Sefadeks oldindan rN i 7,5 bo’lgan 0,01 M tris-NCL buferi bilan ishlov berilishi lozim.

. Gel xromatografiyada ajratib olinishi kerak bo’lgan modda xususiyatidan kelib chiqqan holda, sefadeksni turli ko’rinishlaridan foydalaniladi (Masalan: G100, G200 va x.k.). Quyida achitqilarda keng tarqalgan invertaza fermenti gel-filtratsiyasi bilan tanishamiz. Ma’lum darajada tozalangan invertaza tarkibli supernatantni gel-filtratsiyasi uchun 2.5x60 sm xajmli G-100 sefadeksi bilan to’ldirilgan kolonka tanlab olinadi. Sefadeks oldindan rN i 7,5 bo’lgan 0,01 M tris-NCL buferi bilan ishlov berilishi lozim.

Kolonka sefadeks bilan to’lg’izilgandan keyin oqsil fraktsiyasi kolonkaga quyilib, bufer eritmasi bilan elyuirlanadi. Elyurlanish tezligini 20 ml/soat qilib belgilash mumkin. Kolonkadan elyuirlangan oqsil fraktsiyasi (har bir fraktsiya 4 ml dan iborat) tarkibida ferment miqdorini aniqlash uchun uni Louri usulida miqdoiy analiz qilinadi. Shuningdek, fraktsiyalar tarkibida eng yuqori ferment faolligiga ega fraktsiya tanlab olinadi va kelgusida ishlatilishi yoki ion-almashinuv xromatografiyasi yordamida tozalash mumkin

Kolonka sefadeks bilan to’lg’izilgandan keyin oqsil fraktsiyasi kolonkaga quyilib, bufer eritmasi bilan elyuirlanadi. Elyurlanish tezligini 20 ml/soat qilib belgilash mumkin. Kolonkadan elyuirlangan oqsil fraktsiyasi (har bir fraktsiya 4 ml dan iborat) tarkibida ferment miqdorini aniqlash uchun uni Louri usulida miqdoiy analiz qilinadi. Shuningdek, fraktsiyalar tarkibida eng yuqori ferment faolligiga ega fraktsiya tanlab olinadi va kelgusida ishlatilishi yoki ion-almashinuv xromatografiyasi yordamida tozalash mumkin