3-курс Биоорганик кимё 4-мавзу Оқсилларнинг тузилиш даражалари

Тўртламчи тузилиш молекулалари икки ва ундан ортиқ глобулалардан ташкил топган мураккаб оқсиллар учун характерли ҳисобланади.

Суббирликлар молекулада ион, гидрофоб ва электростатик таъсирлар орқали ушлаб турилади.

• Оқсилларнинг бирламчи тузилиши ва АК кетма-кетлигини аниқлаш
• Ҳамма оқсиллар ўзларининг бирламчи тузилишлари бўйича фарқланадилар. Мумкин бўлган бундай тузилишларнинг бўлиши миқдорий жиҳатдан амалда чегараланган эмас. Дарҳақиқат, 15 аъзоли ҳар хил -аминокислотадан тузилган пептид учун уларни 2015 ўзаро жойлашиш имконияти мавжуд. Биологик вазифани, хусусан, оқсиллар физиологик таъсирининг молекуляр механизмини англаш унинг тузилишини ҳар тарафлама муфассал билмасдан мумкин эмас.
• Оқсил ёки пептидга кирувчи -аминокислоталарнинг кетма-кетлигини аниқлаш мураккаб вазифа бўлиб, одатда охирги -аминокислоталарни аниқлашдан бошланади. N-охирги ва С-охирги -аминокислоталар мавжуд.
• N-охирги -аминокислоталарни аниқлаш
• 1) Нитрит кислотасини таъсир эттириш.
• Бунда гидролиздан сўнг битта -аминокислота йўқолади, унинг ўрнига -оксикислота ҳосил бўлади:

• 2)Алкиллаш ва ациллаш.
• N-охирги -аминокислота алкилланади ёки ацилланади ва натижада унинг алкилли ёки ацилли ҳосиласи ҳосил бўлади.
• 3) Оқсилни динитрофениллаш.
• Пептид ёки оқсил 2,4-динитрофторбензол билан кучсиз ишқорий шароитда (pН 9), 20-250С да ишланади (бу реакцияни 1945 йили Сенджер олиб борган):

• -АКнинг динитрофенилли ҳосиласи сариқ рангли кристалл модда. Гидролиздан сўнг ҳосил бўлган -аминокислота юпқа қатламли хроматография (ЮҚХ) бўйича стандартлар билан солиштириб аниқланади.

• 4) 1-Диметиламинонафталин-5-сульфохлорлаш (дансиллаш) реакцияси, бу реакция 1963 йили Гревед ва Хартлилар томонидан ўрганилган.

• Лизин ёки аргининдан тузилган пептидларни дансил ҳосилалари олинади ва гидролиз қилиниб (5,7 н НСl, 105 0C, 12-16 соатда), лизин ёки аргинин -аминокислоталари олинади ва ЮҚХ орқали стандартлар билан солиштириб аниқланади.
• Дансил гурухларининг интенсив флуоресценцияланиши туфайли -аминокислоталарни жуда оз миқдордаги дансил ҳосилаларини ҳам аниқлаш ва ўлчаш мумкин бўлади.

• 5) Янада кўп тарқалган усуллардан бири пептидларга фенилтиоизоцианатларни таъсир этиш ҳисобланади, бу реакция 1950-1956 йилларда Эдман томонидан олиб борилган:

• 1-босқичда ҳосил бўладиган фенил(тио)карбомоил пептид HCl кислотаси билан нитрометанда аста-секин қиздирилганда фенил(тио)гидантоин ва пептидга парчаланиш билан циклизацияланади.

• Ҳосил бўлган фенил(тио)гидантоин органик эритувчилар билан ажратиб олинади. Уларни шундайлигича ёки -АКгача гидролизлаб аниқланади. Бу жараённи қайтариш мумкин. Бу метод пептид занжиридаги -АК қолдиқларининг кетма-кетлигини аниқлаш учун ҳам яроқлидир. Бу методга асосланган автоматлаштирилган асбоблар ҳам мавжуд. Унинг номини «секвенатор» деб аталади.

•