Fluorophore
Excitation
Category
|
LED
Designation
|
LED FWHM
Bandwidth
(nm)
|
Power
mW/Cm2
(LLG)a
|
Power
mW/Cm2
(Mirror)b
|
Fluorescence
Filter Set
|
Excitation
Bandwidth
(nm)
|
Power
mW/Cm2
(Filter Set)b
|
Ultraviolet (DAPI, BFP)
|
400
|
393-408
|
748
|
23.3
|
DAPIc
|
365/10
|
0.09
|
Cyan (ECFP)
|
445
|
433-453
|
819
|
24.2
|
ECFP 114d
|
440/20
|
9.0
|
Blue (EGFP, Cy2, AF488)
|
465
|
449-473
|
777
|
21.8
|
ET-GFPc
|
470/40
|
17.5
|
Blue-Green (EYFP)
|
505
|
491-520
|
308
|
6.4
|
ET-YFPc
|
500/20
|
2.8
|
Green (AF532)
|
525
|
503-539
|
273
|
6.6
|
TRITC HQc
|
545/30
|
1.5
|
Green (TRITC, Cy3, AF546)
|
535
|
503-573
|
383
|
9.5
|
TRITC HQc
|
545/30
|
2.6
|
Green-Yellow (TRITC, Cy3)
|
565
|
515-594
|
333
|
7.3
|
TRITC HQc
|
545/30
|
1.9
|
Green-Yellow (TRITC, Cy3)
|
565
|
515-594
|
333
|
7.3
|
TR HQc
|
560/55
|
3.2
|
Yellow (TR, MitoTracker)
|
585
|
547-613
|
348
|
5.9
|
TR HQc
|
560/55
|
2.8
|
Orange (TR, mCherry)
|
595
|
587-604
|
112
|
2.7
|
TR HQc
|
560/55
|
0.51
|
Red (Cy5, AF635)
|
635
|
620-637
|
370
|
4.6
|
Cy5 XF110d
|
630/50
|
3.5
|
a Suyuq yorug'lik qo'llanmasida o'lchanadib Maqsadda o'lchanadi FPcChroma filtrlaridadOmega filtrlarida
1-jadval
1-jadvalda hozirgi vaqtda floresan mikroskopiyada qo'llaniladigan bir nechta yaqin ultrabinafsha va ko'rinadigan yorug'lik chiqaradigan LEDlar uchun optik chiqish quvvati qiymatlari va FWHM spektral tarmoqli kengligi keltirilgan. Har bir LED uchun quvvat millivatt/sm2 da kataloglangan va suyuq yorug'lik yo'riqnomasi (1-jadvaldagi LLG ustuni) chiqishida, shuningdek mikroskop ob'ektivining fokus tekisligida (40x ftorit quruq, raqamli diafragma = 0,85) o'lchangan. fotodiodga asoslangan radiometr. Yorug'likni ob'ektiv orqali va radiometr datchigiga proyeksiya qilish uchun 350 dan 800 nanometrgacha bo'lgan 95% dan yuqori aks ettiruvchi oyna yoki standart lyuminestsent filtri to'plami ishlatilgan (qiymatlar 1-jadvalda mos ravishda Oyna va Filtrlar to'plami deb nomlangan ustunlarda keltirilgan) . Mikroskopning yoritish tizimidagi yorug'lik o'tkazuvchanligini yo'qotish optik poezddagi filtrlar, nometalllar, prizmalar va linzalar soniga qarab, kirish quvvatining 95 dan 99 foizigacha o'zgarishi mumkin. Tashqi LED yorug'lik manbasiga ulangan odatiy tadqiqot darajasidagi teskari mikroskop uchun suyuqlik yorug'lik qo'llanmasidan chiqadigan yorug'likning 3 foizdan kamrog'i ob'ektiv fokus tekisligida joylashgan ftoroforlarni qo'zg'atish uchun mavjud. Xuddi shunday yorug'lik yo'qotilishi suyuq yorug'lik qo'llanmasi orqali mikroskopga ulangan tashqi metall galoid yorug'lik manbalari, shuningdek chiroqxona orqali to'g'ridan-to'g'ri yoritgichga mahkamlangan an'anaviy ksenon va simob yoyi deşarj lampalarida sodir bo'ladi.
Tijoriy LED chiroqxonalarda har bir tajribada ishlatiladigan turli xil floroforlar uchun mos keladigan qo'zg'alish tarmoqli kengligiga erishish uchun individual diod modullari osongina almashtirilishi mumkin. Har bir LED modulining intensivligi, shuningdek, aniq elektr bosqichlarida (maksimal chiqish foizlari) mustaqil ravishda sozlanishi mumkin, shunda yorug'likning qo'zg'alish davrlari namunaning fototoksikligini oldini olish uchun detektor sezgirligi bilan muvozanatlashtirilishi mumkin. LEDlarning yana bir afzalligi - elektr toki kiritilgandan so'ng to'liq intensivlikda bir zumda yoritish qobiliyati. Ark deşarjli va cho'g'lanma lampalardan farqli o'laroq, LEDlarni qayta-qayta modulyatsiya qilish yoki yoqish va o'chirish, ularning ishlash muddatiga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkin. Bundan tashqari, mexanik qismlarsiz, to'liq elektronli diodli yoritish tizimi deklanşör va neytral zichlikdagi filtr harakati natijasida hosil bo'lgan muammoli tebranishlardan xoli.
Do'stlaringiz bilan baham: |