РОЛЬ МИКРО-РНК В УСТОЙЧИВОСТИ КЛЕТОЧНЫХ
ЛИНИЙ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ К ПАКЛИТАКСЕЛУ
Сидина Е.И., Князева М.С.
Национальный медицинский исследовательский центр
онкологии имени Н.Н. Петрова,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Малек А.В. к.м.н.
Актуальность:
Паклитаксел — один из ключевых противоопу-
холевых препаратов, используемых для лечения рака молочной же-
лезы (РМЖ) в режиме неоадъювантной и адъювантной терапии.
Чувствительность клеток РМЖ к этому препарату варьирует, а со-
временные алгоритмы прогнозирования эффекта терапии и выбора
оптимального препарата не всегда эффективны. МикроРНК пред-
ставляют собой некодирующие одноцепочечные молекулы РНК,
способные регулировать многие физиологические процессы. В ряде
исследований показано, что профиль экспрессии микроРНК связан
с восприимчивостью опухолевых клеток к химиотерапии. Поиск
микроРНК-предикторов чувствительности/устойчивости клеток
РМЖ к паклитакселу представляет большой интерес для практиче-
ской медицины.
Гипотеза:
Оценка изменений профиля экспрессии микроРНК
клеток РМЖ в ответ на сублетальное воздействие паклитаксела в
условиях
in vitro
может отражать реакцию опухоли. При этом харак-
терные для разных культур изменения могут затрагивать молекулы
микроРНК участвующие в консервативных механизмах реакции
клеток на препарат.
Цель:
Оценить реакцию профиля экспрессии опухоль-ассоции-
рованных микроРНК в клетках РМЖ на сублетальное воздействие
паклитаксела, идентифицировать характерные изменения с целью
последующего углубленного исследования роли таких молекул.
Материалы и методы:
Клеточные линии MCF7, BT20, BT474,
MDAMB231, MDAMB453 культивировали в стандартных условиях
в присутствии паклитаксела (1-200 мкM). Оценка жизнеспособно-
сти клеток проводилась с помощью МТТ-теста, чувствительность к
ОНКОЛОГИЯ, ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ И ИХ БИОМЕДИЦИНСКИЕ ОСНОВЫ
437
препарату — путем подсчета IC50. Для анализа профиля микроРНК
проводили ОТ-ПЦР, использовали реагентику компаний MicroGEM,
Exiqon/Qiagen.
Каждая клеточная линия культивировалась с добавлением па-
клитаксела в дозе, соответствующей IC50, а также в отсутствии ци-
тостатика. По истечении 72 часов, полученные образцы клеточных
линий использовались для выделения тотальной РНК. Оценку про-
филя экспрессии проводили для 84 микроРНК согласно протоколу
изготовителя реагентов для ОТ-ПЦР. Для анализа данных использо-
вали программу GenEx.
Результаты:
Проведена обработка данных, полученных в ходе
ПЦР, включающая межплашечную калибровку, проверку качества
образца, нормализацию относительно референсных генов и нор-
мализацию относительно контрольного образца. Выявлены четыре
микроРНК, проявляющие сходное изменение уровня экспрессии во
всех исследованных клеточных линиях: hsa-miR-15a-5p, hsa-miR-
186-5p, hsa-miR-24-3p, hsa-miR-7-5p.
438
ОНКОЛОГИЯ, ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ И ИХ БИОМЕДИЦИНСКИЕ ОСНОВЫ
Do'stlaringiz bilan baham: |