РЕПРОГРАММИРОВАНИЕ ПЕРВИЧНЫХ ДЕРМАЛЬНЫХ
ФИБРОБЛАСТОВ В СРЕДНИЕ ШИПИКОВЫЕ НЕЙРОНЫ
ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ХАНТИНГТОНА
Красковская Н.А., лаб.
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Безпрозванный И.Б., д.б.н.
Болезнь Хантингтона (БХ) является нейродегенеративным, до-
минантно наследуемым генетическим заболеванием. Известно, что
при БХ в первую очередь поражается стриатум, так как клеточной
гибели подвержены ГАМКергические средние шипиковые нейроны
(СШН), которые составляют 95% клеток стриатума. Повреждение
стриатума при БХ приводит к развитию неконтролируемых непро-
извольных движений (хореи), основному клиническому симптому
данного заболевания. Наиболее распространённым способом полу-
чения нейрональных клеток из соматических клеток пациентов для
изучения молекулярно-клеточных основ патогенеза БХ является ис-
пользование индуцированных плюрипотентные стволовые клеток
(Induced pluripotent stem cells, iPSCs). Однако применение iPSCs для
моделирования БХ имеет недостаток, связанный с потерей «возрас-
та» клеток при переходе через плюрипотентное состояние. Альтер-
нативой iPSCs является прямое репрограммирование фибробластов
пациентов в нейроны при помощи микро-РНК (
Victor, M.B., et al.,
2014
). Особенность этого подхода, заключается в сохранение всей
эпигенетической информации, заложенной в клетках и сохране-
ния возраст-ассоциированного фенотипа, что позволяет изучать
патофизиологические особенности заболевания на каждой стадии.
В настоящей работе был оптимизирован оригинальный протокол
репрограммирования, что позволило получить гомогенную популя-
цию СШН. В частности, >95% клеток окрашены на маркеры зрелых
нейронов MAP2 и β-тубулин III. Кроме того, в оптимизированном
протоколе >90% клеток окрашены на маркер нейронов стриатума —
гаммааминомаслянную кислоту и маркер СШН, белок DARPP-32.
В условиях ко-культивирования с нейронами коры мышей, репро-
314
МОРФОЛОГИЯ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ
граммированные СШН способны к формированию синапсов, что
морфологически выражалось в появлении на дендритном древе
СШН дендритных шипиков. Оценка их количества и морфологии
является важным инструментом анализа функциональных измене-
ний в нейронах, происходящих при развитии БХ.
Модифицированный протокол позволяет получить гомоген-
ную популяцию СШН, что существенно снижает вариабельность
в функциональных исследованиях и облегчает интерпретацию по-
лученных результатов и может быть полезен при изучении возраст-
ных особенностей патогенеза БХ, что в перспективе позволит оце-
нить индивидуальные особенности прогрессирования заболевания
и осуществлять персонифицированный подбор терапевтических
лекарственных препаратов на каждой стадии.
Выражаю благодарность научному руководителю за возможность
работы над интересным исследовательским проектом.
МОРФОЛОГИЯ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ
315
Do'stlaringiz bilan baham: |