Введение. Цель, задачи предмета

Цель работы: Ознакомление с одной из ферментных систем неспецифической защиты организма – системой комплемента, освоение реакции связывания комплемента.
Ход работы
Реакция связывания комплемента является высокочувствительным методом исследования, позволяющим выявлять очень незначительные количества антигенов и антител. Метод предполагает следующую последовательность этапов постановки опыта:

• 
  приготовление гемолитической системы,
  
• 
  титрование комплемента для определения его рабочей дозы,
  
• 
  титрование антигена для определения его рабочей дозы,
  
• 
  главный опыт – титрование сыворотки.
  

Гемолитическая система
Исходным материалом для приготовления гемолитической системы служит стандартная гемолитическая сыворотка с титром 1:1200 и 3% взвесь бараньих эритроцитов (табл. 1).
Гемолитическую сыворотку и взвесь эритроцитов готовят в разных колбах, затем сливают в одну колбу и ставят в термостат при 37^оС на 30 мин. Готовую смесь хранят в темном месте при комнатной температуре.
Таблица 1
Соотношение компонентов гемолитической системы для проведения реакции связывания комплемента микрометодом

Объем компонентов, мл	Объем смеси, мл	Объем гемолитической системы, мл
0,025 мл гемолитической сыворотки + 10 мл физиологического раствора 0,3 мл эритроцитов + 9,7 мл физиологического раствора	10 10	20

Титрование комплемента
Для определения рабочей дозы комплемента свежую сыворотку морской свинки титруют в небольших пробирках (удобны пробирки диаметром 5 мм). Исходное разведение сыворотки – 1:10. Необходимые количества комплемента отмеривают микропипеткой. Затем в каждую пробирку приливают по 0,2 мл гемолитической системы. Пробирки инкубируют в термостате при 37^оС в течение 1 ч (табл. 2).
За титр комплемента принимают то минимальное количество комплемента, которое вызывает полный гемолиз сенсибилизированных эритроцитов (в табл. 2 титр комплемента равен 0,025 мл, рабочая доза – 120 % титра, т.е. 0,03 мл).
Таблица 2