|
Контрольные вопросы
Перечислите методы определения накопления биомассы.
Охарактеризуйте особенности глубинного гетерофазного культивирования дрожжей.
Каким образом можно судить об окончании процесса ферментации?
Почему проведение процесса ферментации в отъемно-доливном режиме является предпочтительным?
Каким образом можно интенсифицировать процесс фильтрации дрожжевой суспензии?
Охарактеризуйте основные требования, предъявляемые к кормовым белковым продуктам.
РАБОТА 5: ПИТАТЕЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДЛЯ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ.
Цель работы: ознакомление с методами приготовления питательных сред и приготовление МПБ, МПА.
II.Теория: для выращивания микроорганизмов необходимы питательные среды. При приготовлении питательных сред для микроорганизмов необходимо учитывать потребностъ их в элементах питания.
Питательные среды могут быть естественные и искусственные. К первым относятся продукты растительного (овощи, фрукты, их отвары) и животного происхождения (молоко, мясо, куриное яйцо и т. д.). Чаще используют искусственные среды, содержащие минеральные соли, или минеральные соли в комбинации с органическими соединениями (углеводами, аминокислотами или органическими кислотами и т. д.).
С. Н. Виноградским в практику микробиологии введены элективные (или избирательные) среды для определенных групп микроорганизмов. Зная физиологические особенности соответствующей группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования (состав среды, ее активную кислотность, условия аэрации, температуру и др.), при которых будут развиваться лишь микроорганизмы этой группы. Это позволяет вести различные микробиологические процессы в лаборатории и в производстве без предварительной стерилизации среды.
Питательные среды применяют различной консистенции: жидкие, плотные, полужидкие.
Плотные питательные среды используют для учета количества бактерий, выделения их в чистую культуру и других целей. Такие среды готовят из жидких, добавляя 1,5—2,5% агар-агара или 10—15% желатины. При приготовлении полужидких сред вносят агар-arap в количестве 0,1—0,2%.
Агар-агар — растительный коллоид, получаемый из некоторых морских водорослей. В его состав входят главным образом полисахариды с ничтожным содержанием азотистых веществ. Желатина — кислый азот-содержащий продукт, добываемый путем выварки костей и хрящей.
В качестве плотных питательных сред широко применяют также гелевые пластины, введенные в микробиологическию практику С. Н. Виноградским.
Для выращивания микроорганизмов, использующих органические формы азота, часто употребляют мясопептонные среды: мясопептонный бульон, мясопептонный агар и мясопептонную желатину.
III. Материалы и оборудования: мясной бульон или 500 г мяса без костей, эмалированная кастрюля, 1 л водопроводная вода, нагретой до 50° С, марля со слоем ваты, фильтровальная бумага, колба, ватные пробки, пепсин, соляная кислота, пептон, поваренная соль, 20% раствор Na2CO3 (до посинения влажной красной лакмусовой бумажки), фарфоровая чашка, индикатор, стеклянная палочка, пробирки, агар-агар, воронка, 50 г желатина, 15% желатина, яичный белок, кипятильник Коха, 200 г очищенный картофель, 2% агар, зерна ячменя, йод, 2,5—3,0% агар.
IV. Порядок выполнения работы:
1. Приготовление МПБ (мясопептонный бульон). Для приготовления мясопептонных сред используют мясной бульон, который получают так: 500 г мелко изрубленного свежего мяса без костей, жира и сухожилий заливают в эмалированной кастрюле 1 л водопроводной воды, нагретой до 50° С, и оставляют настаиваться 12 часов при комнатной температуре или 1 час при 50—55° С. Мясо отжимают, экстракт процеживают через марлю со слоем ваты, кипятят в течение 30 минут для свертывания коллоидных белков и фильтруют дважды (первый раз через марлю с ватой, второй — через бумажный фильтр). Фильтрат доливают водой до 1 л, разливают в колбы, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120° С 20 минут (пробки колб закрывают сверху колпачками из бумаги). Ватные пробки должны быть плотными, так как они являются фильтром, препятствующим проникновению бактерий из воздуха после стерилизации.
Мясной бульон может быть использован в любое время для приготовления соответствующих сред. Если их готовят сразу, то предварительная стерилизация излишня.
Нередко в лабораторных условиях мясной настой кипятят вместе с мясом, а затем мясо отжимают. Бульон получается весьма хорошего качества. Если желательно иметь мясной бульон особо высокой питательности, во время настаивания мяса с водой добавляют немного пепсина и подкисляют раствор соляной кислотой. Пепсин дополнительно гидролизует белковые соединения мяса и количество усвояемых бактериями питательных веществ возрастает.
Мясо можно заменить мясным экстрактом, беря его по 5 г на 1 л среды. Для приготовления мясопептонного бульона к 1 л мясного бульона добавляют 5—10 г пептона (пептон — первый продукт гидролиза белка с высоким молекулярным весом) для повышения калорийности среды и 5 г поваренной соли с целью создания осмотической активности. Среду нагревают до растворения пептона, постоянно помешивая. Затем устанавливают нейтральную или слабощелочную реакцию среды, приливая 20%-ный раствор Na2CO3 (до посинения влажной красной лакмусовой бумажки; при этом фенолфталеин еще не показывает щелочную реакцию — при добавлении его к среде в фарфоровой чашке розовая окраска не выявляется). Удобно использовать индикатор. 1—2 капли его вносят стеклянной палочкой в фарфоровую чашку и добавляют каплю бульона. В нейтральной среде бромтимолблау бутылочно-зеленый, в кислой — желтый, в щелочной — синий.
После установления реакции среду снова кипятят 5—10 минут и белки, свернувшиеся от изменения реакции, отфильтровывают через бумажный фильтр без осветления бульона или осветлив его белком. Про-зрачный мясопептонный бульон разливают в пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120° С в течение 20 минут.
2. Приготовление МПА (мясопептонный агар). К 1 л мясопептонного бульона добавляюг 15—20 г мелко нарезанного агар-агара. Среду нагревают до растворения агара (температура плавления его 100° С, застывания — 40° С), устанавливают слабощелочную реакцию среды 20% раствором Na2CO3 и через воронки разливают в пробирки (~по 10 мл для разливок в чашки — агар столбиком и по 5 мл для получения скошенного, наклонного агара). При разливе агара необходимо следить за тем, чтобы края пробирки были сухими, иначе пробки прилипают к стеклу.
Пробирки со средой стерилизуют в автоклаве при 120° С в течение 20 минут.
Do'stlaringiz bilan baham: |
