Влияние температуры и рН на активность ферментов

Таблица
Приготовление фосфатно-цитратных буферных смесей

Смешивание порядковый номер	Показатели рН смеси	0,2M -ый раствор Na2HPO4	0,1 M- ый раствор лимонной кислоты, мл
1	2,2	0,40	19,60
2	2,4	1,24	18,76
3	2,6	2,18	17,82
4	2,8	3,17	16,83
5	3,0	4,11	15,89
6	3,2	4,94	15,06
7	3,4	5,70	14,30
8	3,6	6,44	13,56
9	3,8	7,10	12,90
10	4,0	7,71	12,29
11	4,2	8,28	11,72
12	4,4	8,82	11,18
13	4,6	9,35	10,65
14	4,8	9,86	10,14
15	5,0	10,30	9,70
16	5,2	10,72	9,28
17	5,4	11,15	8,85
18	5,6	11,60	8,40
19	5,8	12,09	7,91
20	6,0	12,63	7,37
21	6,2	13,22	6,78
22	6,4	13,85	6,15
23	6,6	14,55	5,45
24	6,8	15,454	4,55
25	7,0	16,47	3,53
26	7,2	17,39	2,61
27	7,4	18,17	1,83
28	7,6	18,73	1,27
29	7,8	19,15	0,85
30	8,0	19,45	0,55

Амилаза слюнных желез затем используется для определения оптимального рН. Спросите об эксперименте В связи с использованием лаковой амилазы сначала готовят пробу ее сока. Для этого сначала наберите в рот дистиллированной воды, подержите минуту и ​​встряхните. Повторите процесс, взяв в рот вторую дистиллированную воду, подержав ее минуту, перелив в отдельную емкость и процедив. Слюну в фильтрате разбавляют в 100 раз и используют на более поздних стадиях эксперимента.

Поместите семь пробирок на штатив и добавьте 5 мл до первого pH = 4,0 в Таблице 10 № 10; к другому при рН № 15 = 5,0; к третьему рН у № 17 = 5,4; четвертый имел рН №21 = 6,2; к пятому рН у №24 = 6,8; шестую заполняют фосфатно-цитратными буферными смесями с рН №27 при №27 и седьмую с рН №30 при ,030. Затем в каждую пробирку добавляют по 4 мл 0,25% раствора крахмала и по 1 мл разбавленного раствора слюны. Все пробирки переносят в термостат при 380С и время от времени по 2-3 капли каждой переносят в другую пробирку и смешивают с разбавленным раствором Люголя. При этом все растворы вначале образуют синюю окраску, через некоторое время становятся багрово-красными или красными и, наконец, с раствором Люголя никакой окраски не образуют. Для каждой из семи пробирок записывают время отсутствия окрашивания (с точностью до 0,5 мин). Это время указывает на окончание амилолитической активности. Данные представлены в таблице и в виде графической кривой.
Таблица
Результаты определения рН-оптимума фермента амилазы.

Проба рН	Время активности (в минутах)	1:Время активности (в минутах)
4,0	160	0,006
5,0	110	0,009
5,4	60	0,017
6,2	8	0,125
6,8	5	0,200
7,4	14	0,071
8,0	85	0,011

На основании данных таблицы построена кривая, представляющая прямую и обратную зависимость активности фермента амилазы от рН. Значения рН по оси абсцисс графика, отношение оси ординат к первой единице времени в конце амилолитической активности в минутах и ​​отношение 1 ко второй оси ординат в минутах. Данные в образцах отмечены точками слева направо, и эти точки соединены друг с другом.


Вопросы для закрепления темы
1. Термолабильность ферментов.
2. Зависимость ферментативной реакции от рН. Что такое рН-оптимум?