Universum: химия и биология


Материалы и методы исследований



Download 4,39 Mb.
Pdf ko'rish
bet16/106
Sana22.02.2022
Hajmi4,39 Mb.
#91330
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   ...   106
Bog'liq
2(68)

Материалы и методы исследований. Материа-
лом исследований служили виды грибов рода 
Trichoderma, выделенные из почвы Ташкентской об-
ласти. С целью изучения возможности получения 
протопластов у исследуемых культур, грибы выра-
щивали глубинным способом на жидкой среде Ман-
дельса в течение 24-48 часов при 30
0
С. 
Выросший мицелий, осажденный центрифугиро-
ванием в стерильных условиях при 3000 об/мин в те-
чение 10 мин. Отмывали от среды сначала 2 раза ди-


№ 2 (68)
февраль, 2020 г.
18 
стиллированной водой, а затем дважды раствором ос-
мотического стабилизатора. Отмытый мицелий обра-
батывали литической смесью. 
При изучении влияния литических ферментов на 
выход протопластов, взятых в опыт культур, в каче-
стве литической смеси для получения протопластов 
использовали лиофилизированный препарат пищева-
рительного сока виноградной улитки Helix pomatia 
(ПСУ) в растворе осмотического стабилизатора (10 
мг/мл), лизоцим (10 мг/мл), ферментный препарат, 
полученный из культуральной жидкости Strepto-
myyces afghaniensis - 7 (10 мг/мл), обладающий актив-
ностью целлобиазы, протеазы, пектиназы и амилазы, 
смесь, состоящую из ПСУ (10 мг/мл) и лизоцима (5 
мг/мл), смесь ферментного препарата Streptomyyces 
afghaniensis - 7 (10 мг/мл) и лизоцима (5 мг/мл). 
Кроме вышеуказанных литических ферментов в ра-
боте использовали фермент из Trichoderma lignorum 
(целлолигнорин). В качестве соматического стабили-
затора во всех случаях использовали 0,7 М раствор 
NaCl. Литическую смесь стерилизовали через бакте-
риальный фильтр с диаметром пор 0,23 мкм и хра-
нили при 5
0
С. 
В опытах по изучению влияния осмотических 
стабилизаторов на частоту образования и процесс ре-
генерации протопластов у Trichoderma и Aspergillus 
в качестве стабилизаторов были использованы NaCl, 
KCl, MgSO
4,
сахароза, маннит. Все испытанные ста-
билизаторы были взяты в концентрации 0,4 и 0,7 М и 
0,2 М K-Na фосфатном буфере, рН 6,0-6,2. 
Мицелий грибом инкубировали в литической 
смеси при 30
0
С в течение 4-6 часов. Контроль за об-
разованием протопластов проводили методом свето-
вой микроскопии окрашивая клетки слабым водным 
раствором метиленового синего. Пробы отбирали 
каждые 30 мин. В течение всего времени инкубации. 
Через 4-6 часов от начала инкубации в литиче-
ской смеси образовавшиеся протопласты осаждали с 
помощью центрифугирования, при этом число обо-
ротов снижали до 1000 об/мин., так как протопласты 
чувствительны к повышенным нагрузкам. Затем про-
топласты дважды промывали в растворе осмотиче-
ского стабилизатора от литической смеси, отделяли 
от мицелий фильтрованием через стеклянный фильтр 
№3 и учитывали количество клеток в камере Горяева. 
Регенерацию протопластов осуществляли на 
среде Чапека с осмотическим стабилизатором по ме-
тоду, в основу которого был положен способ регене-
рации, предложенный Кожиной с соав.[5]. 
Проводя несколько последовательных разведе-
ний в осмотическом стабилизаторе, с помощью под-
счетов в камере Горяева определялось число прото-
пластов в исходной суспензии. В дальнейшем ис-
пользовалась суспензия с концентрацией 10

прото-
пластов в 1 мл. 0,25 мл суспензии вливали в 50 мл 
теплой растопленной среды Чапека с осмотическим 
стабилизатором, эта смесь разливалась на поверх-
ность 5 чашек Петри с заранее разлитой средой того 
же состава. Эта среда должна обеспечить регенера-
цию клеточной стенки. Для контроля то же количе-
ство протопластов высевали непосредственно на по-
верхность среды Чапека, не содержащей осмотиче-
ского стабилизатора. Число регенерирующих прото-
пластов выражали в процентах от числа протопла-
стов в суспензии. 

Download 4,39 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   ...   106




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish