Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Моча, раствор гексациано-(III)-феррата калия (10 %), раствор 
гидроксида натрия (20 %), рабочий стандартный раствор тиамина (10 мкг в 
1 мл), эта­ нол, изобутанол. Флюорометр, штатив с пробирками, пипетки, 
делительные воронки. 
Ход работы: 
В делительную воронку наливают
 
6–8 мл мочи,
 
прибавляют
 
равный объем изобутанола и встряхивают в течение 2 минут. Промытую мочу 
(нижний слой) сливают в две сухие делительные воронки (по 2 мл) и 
прибавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия. 
91 

---

В
опытную воронку по каплям вносят свежеприготовленный раствор 
гексациано-(III)-феррата калия до тех пор, пока окраска не сохранится в течение 
полминуты. В опытную и контрольную воронки прибавляют по 5 мл 
дистиллированной­ воды, по 10 мл изобутанола и интенсивно встряхивают в те-
чение 2 минут. Нижний слой мочи сливают, а верхний (изобутанол) собирают 
в
две сухие пронумерованные пробирки. 
В
третью делительную воронку вносят 1 мл рабочего стандартного раство-
ра тиамина и 1 мл воды, в четвертую — 2 мл дистиллированной воды. В обе 
воронки прибавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия, по 10 капель рас-
твора гексацино-(III)-феррата калия, встряхивают, доливают по 5 мл воды 
и
по 10 мл изобутанола, снова встряхивают в течение 2 минут. Нижний слой 
удаляют, а верхний собирают в две сухие пронумерованные пробирки. 
Для просветления растворов во все четыре пробирки — опытную, стандарт­ 
ную и две контрольные — добавляют по 2 мл этанола. Проводят сравнение 
интенсивности флюоресценции исследуемой мочи и контроля. Содержание 
тиамина определяют на флюорометре по флюоресценции тиохрома. 
Массовую концентрацию тиамина (мкг) в исследуемом материале находят 
по формуле