Учебное пособие / А. И. Жебентяев. Витебск: вгму,2014

Глава 10. Вещества, определяемые непосредственно
в биологическом материале 
100
A
A
A
A
%
HbCO,
583
B
531
B
583
A
531
A
⋅
−
−
=
Выполнение определения карбоксигемоглобина в крови. 
Исследуемую кровь разбавляют 0,1% раствором аммиака (к 0,5 
мл крови в колбе вместимостью 100 мл прибавляют 0,1% раствор 
аммиака до метки) – в этом растворе могут быть оксигемоглобин, 
дезоксигемоглобин и карбоксигемоглобин. К части этого раствора 
прибавляют дитионит натрия (3,5 мг) – в этом растворе может 
содержаться карбоксигемоглобин и дезоксигемоглобин (раствор А). 
Измеряют оптическую плотность этого раствора при 531 нм и 583 нм. 
Затем 10–30 мл этого раствора насыщают монооксидом углерода в 
приборе для получения монооксида углерода (рис. 10.1) в течение 10 
мин, добавляют 3–5 мг дитионита натрия и снова насыщают 
монооксидом углерода в течение 5 мин (раствор В). Измеряют 
оптическую плотность раствора В при 531 нм и 583 нм и рассчитывают 
содержание карбоксигемоглобина в крови по формуле: 
(10.3) 
где А
531
A
531 
и A
583
A
– 
оптические плотности раствора А при 
длинах волн 531 нм и 583 нм; А
531
B
и А
583
B
– 
оптические плотности 
раствора В. 
Рис.10.1. Аппарат для насыщения крови монооксидом углерода. 
369 

---

Глава 10. Вещества, определяемые непосредственно
в биологическом материале 
1 – 
колба, содержащая концентрированную серную кислоту; 2 – 
делительная воронка, содержащая муравьиную кислоту; 3 – 6 − 
склянки Дрекселя: склянка 3 содержит раствор гидроксида натрия; 
склянка 5 – анализируемый раствор; склянки 4, 6 – дистиллированную 
воду, 7 – отводная трубка. 
Методика определения карбоксигемоглобина в крови, описанная 
в учебнике «Токсикологическая химия» (Крамаренко В.Ф., 1989г, 
с.419–423) отличается длинами волн, при которых проводят измерение 
оптической плотности растворов крови до насыщения и после 
насыщения монооксидом углерода.
 
Выполнение определения карбоксигемоглобина (по В.Ф. 
Крамаренко). 
Для приготовления раствора А 1 мл исследуемой крови вносят в 
мерную колбу вместимостью 100 мл и разбавляют фосфатным 
буферным раствором (рН = 7,38). Часть этого раствора вносят в кювету 
с толщиной слоя 1 см, прибавляют 3–4 мг дитионита натрия и 
содержимое 
кюветы 
перемешивают 
стеклянной 
палочкой 
(карбоксигемоглобин с дитионитом не реагирует, а оксигемоглобин и 
метгемоглобин восстанавливаются до дезоксигемоглобина). Измеряют 
оптическую плотность при 538 и 550 нм. 
Раствор В готовят в приборе для получения монооксида углерода 
и насыщения крови монооксидом углерода. 
В реакционную колбу 1 вносят 50 мл концентрированной серной 
кислоты, а в капельную воронку 2–10 мл муравьиной кислоты. В 
склянках Дрекселя находятся 10%-й раствор гидроксида натрия, 
дистиллированная вода, раствор А, в таких количествах, чтобы трубки 
были погружены на 2 см в жидкость. 
Для увеличения скорости выделения СО колбу в начале опыта 
осторожно нагревают на небольшом пламени газовой горелки. 
Муравьиную кислоту по каплям приливают в подогретую колбу. 
Получение СО и насыщение крови монооксидом углерода должно 
проводиться в вытяжном шкафу. 
После пропускания СО в течение 15 мин через склянки Дрекселя 
отсоединяют склянку 5, в которую добавляют 5–7 г дитионита натрия 
(жидкость хорошо взбалтывают) и еще 5 мин пропускают монооксид 
углерода. Такая методика обусловлена тем, что в течение 15 мин 
оксигемоглобин полностью превращается в карбоксигемоглобин, но 
остается некоторое количество метгемоглобина, который с помощью 
дитионита натрия переводят в дезоксигемоглобин, а затем в 
карбоксигемоглобин. 
370 

---