Учебно-методический комплекс ферганский филиал узбекского государственного университета физической культуры и спорта

Оборудование: термостат или водяная баня, пипетки, пробирки.
Реактивы: раствор слюны, разведенный дистиллированной водой 1:5; 1%-раствор крахмала; реактив Троммера (см. занятие 2, опыт 1).
Ход работы.
Слюну разводят дистиллированной водой 1:5. В чистую пробирку отливают небольшое количество разведенной слюны (2-3 мл) и оставляют в кипящей водяной бане в течение 5-8 мин, затем пробирку с содержимым охлаждают. В три пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В первую пробирку добавляют 10 капель слюны разведенной в 5 раз, во вторую 10 капель прокипяченной слюны и в третью пробирку – 10 капель дистиллированной воды. Все три пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре 38^оС на 10 минут. После истечения срока пробирки вынимают и в каждой пробирке проделывают реакции Троммера для выявления продуктов гидролиза крахмала. Если реакция положительная, то крахмал гидролизовался α-амилазой слюны с образованием мальтозы и глюкозы. При отрицательной реакции крахмал не гидролизовался.


Опыт – 2. Влияние рН среды на активность α - амилазы слюны
Активность фермента существенно зависит от активной реакции (рН) среды. Для каждого фермента существует оптимальное значение рН среды, при котором фермент проявляет свою наивысшую активность. Этот диапазон рН называется рН-оптимумом фермента. Для определения рН-оптимума фермента, ферментативную реакцию проводят при различных значениях рН среды.
Оборудование: термостат или водяная баня, штатив для пробирок, пипетки, пробирки.
Реактивы: 0,5%-раствор крахмала в 1%-растворе NaCl; раствор слюны, разбавленной дистиллированной водой 1:10; 0,2 М – раствор Na₂HPO₄; 0,1 М – раствор лимонной кислоты; реактив Троммера.
Ход работы:
В 7 пробирок наливают 0,2 М раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na₂HPO₄) и 0,1 М раствора лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице. При этом получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 0,5%-раствора крахмала в 1% растворе NaCl и по 10 капель слюны разбавленной дистиллированной водой 1:10. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38^оС на 5-8 минут.
Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл реактива Троммера, перемешивают и нагревают в кипящей водяной бане. Результаты отмечают в таблице.