Содержания глюкозы и С-пептида в крови определяли на
биохимическом анализаторе Daytona фирмы «Randox» (Великобритания) с
использованием специальных наборов и программы.
Содержание общего холестерина в сыворотке крови определяли
методом по Ильку (1982).
Содержание цитокинов в сыворотке крови проводили методом
иммуноферментного анализа в ЦНИЛ ТМА анализаторе фирмы «Stat-Fax»
(США) с использованием
набора тест-систем, производимых фирмой ООО
«Цитокин» (Санкт-Петербург), их содержание выражали в пг/мл.
Показатели дисфункции эндотелия в сыворотке крови определяли
иммуноферментным методом на иммуноферментном анализаторе АТ858
(Китай).
Митохондриальную и микросомальную фракции печени и почек
выделяли дифференциальным центрифугированием на рефрижераторной
ультрацентрифуге VAC-601 (Германия). Для этого экспериментальных
животных забивали под эфирно-масочным наркозом в холодной комнате при
температуре 0
+
–4
0
С путем одномоментной декапитацией.
Определение активности ферментов МОС печени и почек. Содержание
цитохрома
Р-450
в
микросомальной
суспензии
определяли
на
спектрофотометре UV-2100 LTD Китай по методу T.Omura, R.Sato (1968).
Определение активности митохондриальных ферментов печени и почек:
цитохромоксидазы (ЦХО) – полярографическим
методом на полярографе LP-
7 с закрытым платиновым электродом типа Кларка, сукцинатдегидрогеназы
(СДГ),
сукцинат-цитохром
С-редуктазы
(СЦС-ред.),
ротенон-
нечувствительной
НАДН-цитохром
С-редуктазы
(РН-цит.С-ред.)
и
моноаминооксидазы (МАО) спектрофотометрическим методом на СФ-46
[Chance B., Williams C.R., 1955].
Содержание малонового диальдегида (МДА) в гомогенатах печени и
почек определяли по методу Л.И.Андреевой и др. (1989). Состояние АОС
оценивали по активности ее основных ферментов – каталазы,
супероксиддисмутазы (СОД).
Активность каталазы определяли по методу М.А.Коралюка и др. (1988).
Активность
СОД
определяли
по
проценту
восстановления
нитротетразолиевого синего в щелочной среде и выражали в условных ЕД на
мин/мг белка (Мхитарян В.Г., Бадальян Г.Е., 1978).
Состояние NО-эргической системы в
гомогенате печени и почек
оценивали по содержанию стабильных метаболитов NО (NО
2
-
и NО
3
-
);
активности синтазы оксида азота и уровня пероксинитрита (ОNO
2
--
).
Уровень NO определяли по сумме метаболитов нитритов и нитратов
(NO
2
-
и NO
3
-
) – метод П.П.Голикова и др. (2000).
Уровень
пероксинитрита
(ONO
2
-
)
определяли
по
окислению
гидроксиламином (NH
2
O
-
) образовавшегося пероксинитрита в реакции
ONOO
-
+ NH
2
O
-
2
Cu
NO
2
-
+ NO + H
2
O по методу N.W.Kooy и др. (1995) в
модификации Р.К. Азимова, А.С. Комарина (2005).
Статистическая
обработка
результатов.
Цифровой
материал
статистически обрабатывали на персональном компьютере с применением
пакета прикладных программ для статистического анализа.
В третьей главе диссертации
Do'stlaringiz bilan baham: