“тиббий биология” модули бўйичаўҚУВ–услубий мажмуа

Молекуляр биология усуллари. 
Молекуляр биология – бу генетик маълумотларни сақлаш, узатиш ва 
реализацсия қилиш механизмларини, тартибсиз биополимерларнинг 
(оқсиллар ва нуклеин кислоталари) тузилиши ва функцияларини 
ўрганадиган биология фанларининг мажмуасидир. 
Ҳужайра геномининг ишлаши (унда бегона ДНК мавжудлиги ва 
бошқалар) билан боғлиқ диагностика муаммоларини ҳал қилиш учун 
хромосомалар ўрганилади ва молекуляр биология усуллари қўлланилади: 
хромосома таҳлили, in situ гибридизация усули (ўрганилаѐтган 
объектларнинг структураси яхлитлигини сақлаш орқали ҳужайра 
тузилмаларида нуклеин кислоталарни тўғридан-тўғри аниқлаш усули), in 
situ полимераз-занжир реакцияси. 
Хромосомал таҳлил ѐрдамида туғма ва орттирилган ҳужайралар 
геномидаги нуқсонлар аниқланади. Ушбу таҳлил ўсмаларни аниқлаш учун 
айниқса муҳимдир, бунда хромосомаларнинг махсус маркерли қайта 
қурилишлари ѐки абберацисини кузатиш мумкин. Ушбу мақсадлар учун 
бир хил тўқима туридаги ҳужайра културалари ѐки ҳатто моноклонал 
(яъни, битта ҳужайрали ҳужайрадан келиб чиққан чизиқ) ҳужайралар 
ишлатилади. Култура ҳужайралари бласт ҳужайралар (фаол кўпайишга 
қодир 
анча 
кам 
етилган 
ҳужайралар)га 
трансформацияланиши 
стимулланади, кейин колхицин ѐрдамида метафаза босқичида митоз 
тўхтатилади (бу босқичда хромосомаларни ўрганиш қулай, сабаби улар 
ѐйиқ ҳолатга ўтиб олишади). Цитологик препаратлар тайѐрланган ва 
бўялганидан кейин ҳар хромосома жуфтлигида ѐрқин (бўялмаган) ва тўқ 
(бўялган) қисмлари (бандс) аниқланади, шунинг учун ҳам бу услуб 
бэндинг номни олган. 
―in situ-гибридизация‖ усули техникаси, ҳужайра ичида, ҳужайра 
юзасида ва ҳужайралараро бўшлиқда оқсилни белгилаш имконини берувчи 
иммунгистокимѐвий таҳлилдан фарқли улароқ, гистологик кесимларда, 
цитологик 
суртмаларда, 
ҳужайралар 
културасида, 
хромосома 
препаратларида нуклеин кислоталарининг (НК ѐки РНК) специфик кетма-
кетилигини тақсимланишини морфологик жиҳатдан намойиш қилиш 
хусусиятига эга. Ҳар бир гибридизация негизида тамғаланган зонднинг 
(нуклеин кислотасининг маълум бўлган диагностик ферменти) нишон-
нукелеин кислота (текширилаѐтган материал) билан ўзаро таъсири ѐтади. 
Иммунгистокимѐ услубига солиштирганда ―in situ-гибридизация‖ 
усулининг асосий устунликлари: анчагина спецификлиги, ДНКлар 
формалин билан фиксацига сезгир эмас, антиген-антитанача комплексига 

---

80 
қарагана гибрид зонд-нишон анча барқарор, зондларнинг анча кенг 
миқѐсда мавжудлиги ва уларни ишлаб чиқаришнинг оддийлиги молкуляр 
даражада ташхислаш имконини беради. Клиник амалиѐтда ҳозиргивақтда 
―in 
situ-гибридизация‖нинг 
иккита 
варианти 
қўлланилади: 
иммунгистокимѐда кенг қўлланиладиган биотинли тамға билан 
ўтказиладиган хромоген (АҚШ), ѐки флюоресцентли. Препаратлар 
таҳлили кўпинча ѐруғлик (радиофаол ва бўяладиган тамғада) ѐки 
флюоресцент (флюрохромлар билан тамғалашда) микроскоп остида таҳлил 
қилинади. ―in situ-гибридизация‖ усулининг камчилиги – бу унинг 
нсибатан паст сезувчанлигидир, ушбу камчилик полмеразли-занжир 
реакция қўлланилиши билан компенсация қилинади. 
Полимераз-занжирли реакция – биологик материалда нуклеин 
кислоталари 
(ДНК)нинг 
маълум 
бир 
фрагментларини 
кичик 
концентрацияларини анчагина орттиришга имкон берувчи молекуляр 
биология услубидир. Услуб негизида сунъий шароитларда НКнинг маълум 
бир қисмини амплификациялаш (кўп сонли танланган нусхалаш) ѐтади. 
Полмераз-занжирли реакцияда дастлабки бошланғия материал сифатида 
РНК ҳам ишлатилиши мумкин – бу услуб қайта транскрипцияли полмераз-
занжирли реакци деб номланган. Унинг ѐрдамида комплементар ДНКни 
тузиш содир бўлади, у полимераз-занжирли реакция билан аниқланади. 
Ҳозирги кунда полмераз-занжирли реакция услуби текширилаѐтган 
нуклеин кислоталарига миқдорий баҳо бера оладиган реал вақт 
оралиғидаги полимераз-занжирли реакция куўриниишида ривожланган. 
Бундан ташқари, полимераз-занжирли реакция ва нуклеин 
кислоталарининг ҳужайра ичидаги жойлашишини умумлаштирган in situ 
полмераз-зажирли реакция техникаси ҳам маълум. Ҳужайра ичида 
ампликонларни аниқлаш иккита усул билан амалга оширилади: in situ 
гибридизация (билвосита in situ полмераз-занжирли реакция) ѐрдамида, 
терминал цикллар вақтида ампликонларга киритилган тамғаланган 
нуклеотидларни бевосита аниқлаш (бевосита in situ полимераз-занирли 
реакция, тезлаштирилган варианти). Бу техника кўп ҳолларда бевосита 
гистологик препаратларда анча паст репликация хусусиятига эга 
экилмайдиган вирусларни (гепатит С вируси) аниқлашда қўлланилади.