Technical Note 17 — June 2012

3.5.1.1 LOD based on visual evaluation 

Visual evaluation may be used for non-instrumental methods but may also be used with instrumental 

methods. It is also useful for establishing the LOD for qualitative measurements. 

 

The detection limit is determined by the analysis of sample blanks samples with known concentrations of 

analyte and by establishing the minimum level at which the analyte can be reliably detected.  

 

Sample blanks are spiked with an analyte at a range of concentration levels. At each concentration level, it 

will be necessary to measure approximately 7 independent replicates (as mentioned previously, in reality this 

number is often surpassed). Measurement of the replicates at various levels should be randomised. A 

response curve of percentage positive (or negative) results versus concentration should be constructed from 

the data, from which it should be possible to determine, by inspection, the threshold concentration at which 

the test becomes unreliable. 

 

The limit of detection applied to microbiological tests, is the presence or absence of 1cfu in a fixed amount of 

sample. Although it can be investigated and proven in theory, in practice, this is very difficult to prove 

because of the presence of competing microorganisms as well as sample effects on the organisms. It is 

therefore satisfactory to use test samples contaminated with 5-10 cfu to determine the limit of detection 

(SANAS TG 28-02, 2008). 

Example: 

One method to demonstrate the limit of detection for a microbiological quantitative assay is to evaluate two 

methods (alternative and compendial) by inoculation with a low number of challenge microorganisms (not 

more than 5 cfu per unit) followed by a measurement of recovery. The level of inoculation should be adjusted 

until at least 50% of the samples show growth in the compendial test. It is necessary to repeat this 

determination several times, as the limit of detection of an assay is determined from a number of replicates. 

The ability of the two methods to detect the presence of low numbers of microorganisms can be 

demonstrated using the Chi square test.