Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Рекомбинантная дестабилаза может разрушать изопептидные связи
в старых тромбах в условиях 
in vitro
Бобровский П.А., Манувера В.А., Лазарев В.Н.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный научно-клини-
ческий центр физико-химической медицины Федерального медико-биологического 
агентства», Россия, Москва
Существенным недостатком существующих используемых в настоящее время 
тромболитических лекарств является тот факт, что эффективность препаратов опреде-
ляется «возрастом» тромба: чем старше тромб, тем труднее он поддается лизису проте-
иназами. В старых тромбах молекулы фибрина сшиты между собой поперечными 
изопептидными связями, которые образуются под действием фактора XIIIа. В данной 
работе мы исследуем растворение старых тромбов за счет разрушения изопептидных 
связей рекомбинантным ферментом дестабилазой. Дестабилаза является белком сек- 
рета слюнных желез медицинских пиявок. Она относится к лизоцимам i-типа и обладает 
мурамидазной и изопептидазной ферментативными активностями.
В работе использовали тромбы, извлеченные в ходе оперативного лечения паци- 
ентов. Тромбы высушивали, взвешивали и обрабатывали рекомбинантной дестаби-
лазой в течение 24 часов. Затем их снова высушивали и взвешивали для определения 
изменения массы тромба. Было показано, что дестабилаза вызывает снижение массы 
тромба на 27,7% ± 1,8% по сравнению с контрольным буферным раствором (9,1% ± 0,6%) 
с уровнем значимости р = 0,0134. Далее, сухие тромбы инкубировали в 2% растворе 
уксусной кислоты и определяли степень дестабилизации тромбов путем оценки 
количества белково-пептидного материала, измерением поглощения при длине волны 
280 нм. Было обнаружено, что тромбы, предварительно обработанные контрольным 
раствором, практически не растворились в 2% уксусной кислоте, в то время как тромбы, 
обработанные дестабилазой, полностью растворились. Сравнение оптической плотности 
2% раствора уксусной кислоты, содержащего дестабилизированный фибрин остаточных 
тромбов показал значимое отличие от контрольного образца в 7 раз (р = 0,0059). 
Предложенный подход позволяет оценить непосредственное влияние дестабилазы 
на уровень стабилизации фибрина в тромбе. Дестабилаза медицинской пиявки может 
служить тромболитическим агентом для более эффективного растворения старых 
тромбов, в дополнение к традиционным тромболитикам.
Авторы выражают благодарность Басковой И.П., а также Немировой С.В. за предоставлен-
ный биологический материал. Исследование было поддержано грантом РНФ № 17-75-20099.

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
150