С. А. Эгамбердиева молекуляр

 
Расм 6.5. ДНК икки турли хил намуналарининг 
Bат
HI эндонуклеаза 
ёрдамида бўлинганда ҳосил бўлган фрагментлар комплементар ёпишқоқ 
учларининг ренатурацияси (тикланиши, отжиги)
. 
Расмда тасвирланган 
тўрт фрагмент бир-бири билан ДНКнинг олти хил турли молекулаларини 
ҳосил қилиб бирлашиши мумкин (расмда мумкин бўлган 
комбинацияларнинг ҳаммаси ҳам кўрсатилмаган). Фрагментлар 
ёпишқоқ учларнинг тўрт асоси орасида ҳосил бўлган водород боғламлари 
билан бирга ушлаб турилади, лекин бу боғламлар эритмадаги 
молекулалар узоқ вақт стабил қолиши учун етарлича мустаҳкам эмас. 
(Глик ва Пастернак бўйича)
Молекуляр клонлашни амалга ошириш учун фақат рестрикция 
ферментларининг ўзигина етарли эмас. Биринчидан, ёпишқоқ учлар 
ҳосил қиладиган ўша тўрт асос орасидаги водород боғламлари 

---

52 
ДНКнинг бирлашаётган икки фрагментини ушлаб туриш учун 
етарлича мустаҳкам эмас, молекуланинг шакарфосфат рамкадаги 
узилишларни бартараф этиш учун, яъни бир занжирнинг 3'-гидроксил 
охирги гуруҳи ва бошқа занжирнинг 5'-фосфат гуруҳи орасидаги 
боғламни тиклаш учун қандайдир восита зарур. Бактериофаг Т4нинг 
ДНК-лигазаси ана шундай восита ҳисобланади. 
Мазкур фермент ёпишқоқ учлар жуфтлашиши туфайли 
биргаликда ушлаб туриладиган полинуклеотид занжирларнинг 
учлари ўртасидаги фосфодиэфир боғламлар ҳосил бўлишини 
катализлайди. Бундан ташқари ДНК-лигаза Т4 бирлашаётган 
фрагментлар фермент билан бирлашгандан кейин бир-бири билан 
яқинлашаётган тўмтоқ учларни “улайди”. Иккинчидан, агар янги 
ҳосил бўлган комбинациялар (рекомбинант ДНК) ҳужайра-
хўжайинда 
репликацияланмаса 
ДНК 
турли 
молекулалари 
бирлашишининг ўзи фойдасиз. Шундай қилиб, ДНК рекомбинант 
молекуласининг бир қисми клонлаш мўлжал қилинаётган керакли ёд 
генни ташиса, бошқа қисми рекомбинант ДНКнинг ҳужайрадаги 
репликацияси учун зарур бўлган ахборотни ўзида сақлайди. Бу 
муаммони ҳал қилиш учун клонловчи векторлардан фойдаланилади. 
Учинчидан, ДНК рестрикцияланганда турли хил фрагментлар 
аралашмаси ҳосил бўлади, ва уларнинг векторли ДНК билан 
лигирланишидан 
(уланишдан) 
кейин 
кўпгина 
турли 
хил 
комбинациялар ҳосил бўлади. Керакли нуклеотидлар кетма-
кетлигига эга бўлган ДНКни сақлаб қолган реципиент ҳужайраларни 
таниб олиш зарур. Бунинг учун турли хил скрининг тизимларидан 
фойдаланилади.