Reja : I. Molekulyar klonlash usuli haqida Genlarni klonlashda qo'llanilishi 3

Klonlash usullari

Molekulyar klonlash - bu ko'p sonli bir xil nusxalarni yaratish uchun DNKning ma'lum bir qismini xost organizmiga ajratish va kengaytirish uchun zarur bo'lgan eksperimental protseduralar to'plami. Qiziqarli yagona DNK ketma -ketligini o'rganishga imkon berishdan tashqari, molekulyar klonlash eng turli xil quyi oqim ilovalari uchun DNK fragmentlarining murakkab birikmalarini yaratishga imkon beruvchi kuchli texnikadir. Shunday qilib, bu jarayon ko'pgina zamonaviy biotibbiyotning asosiy tadqiqotlari va tarjima dasturlari uchun kalit hisoblanadi. Ushbu bobda zamonaviy molekulyar klonlash protseduralari va ularning potentsial qo'llanilishi haqida umumiy ma'lumot beriladi va cheklovchi fermentga asoslangan an'anaviy klonlash tajribasini o'tkazish uchun zarur bo'lgan asosiy tushunchalar va protokollar taqdim etiladi.ikki DNK fragmentini hazm qilish va bog'lash.

Rekombinant DNKni qurish

DNK klonlash va ilovalar

Laboratoriyada DNK bo'laklarini klonlashning ko'p usullari ma'lum umumiy xususiyatlarga ega. Umumiy yondashuvlardan biri bakteriyalar (ko'pincha, ichak tayoqchasi) va ularning plazmidlaridan foydalanadi. Bakterial plazmidlar nisbatan kichik, dumaloq DNK molekulalari bo'lib, bakterial xromosomadan alohida ko'payadi. Laboratoriyada genlarni yoki boshqa DNK qismlarini klonlash uchun avval bakteriya hujayrasidan plazmid ajratiladi, so'ngra unga begona DNK kiritiladi. Olingan plazmid endi ikkita manbadan olingan DNKni birlashtirgan rekombinant DNK molekulasidir. Plazmid bakterial hujayraga qaytarilib, rekombinant bakteriya hosil qiladi va u klon hosil qilish uchun ko'payadi. bir xil hujayralardan iborat. Bo'linuvchi bakteriyalar rekombinant plazmidni takrorlashi va uni o'z avlodlariga o'tkazishi sababli, begona gen bir vaqtning o'zida "klonlanadi". Shuning uchun hujayralar klonida genning bir nechta nusxalari mavjud. Klonlangan genlar ikkita asosiy maqsad uchun foydalidir: ma'lum bir genning ko'plab nusxalarini yaratish va oqsil mahsulotini ishlab chiqarish. Tadqiqotchilar asosiy tadqiqotlarda foydalanish yoki organizmga zararkunandalarga chidamlilik kabi yangi metabolik qobiliyatni berish uchun klonlangan genning nusxalarini bakteriyalardan ajratib olishlari mumkin. Masalan, bir ekin turida mavjud bo'lgan qarshilik geni klonlanishi va boshqa turdagi o'simliklarga o'tkazilishi mumkin. Shu bilan bir qatorda, inson o'sish gormoni kabi tibbiy maqsadlarda ishlatiladigan protein, oqsil uchun klonlangan genni tashuvchi bakterial madaniyatlardan ko'p miqdorda yig'ib olinishi mumkin. Aksariyat protein kodlovchi genlar har bir genomda faqat bitta nusxada, ya'ni million DNKning bir qismiga to'g'ri keladi, shuning uchun bunday noyob DNK qismlarini klonlash qobiliyati juda qimmatlidir.