Производство иммунобиологических лекарственных препаратов Производство противобактериальных вакцин и бактериальных антигенов-диагностикумов

Анатоксины

• Технология получения анатоксинов сводится к следующему: на первом этапе выращивают культуру токсигенных бактерий (возбудителей дифтерии, столбняка, ботулизма, брадзота, энтеротоксемии и др.) на жидкой питательной среде. Выращенную культуру, содержащую бактериальные клетки и культуральную жидкость с энтеротоксином, подвергают биологическому контролю накопления в культуральной жидкости экзотоксина, для чего из ферментера с соблюдением правил асептики отбирают пробу, которую исследуют на концентрацию полученного токсина методом титрации разведенного до определенного титра токсина и внутривенного введения белым мышам для определения минимальной летальной дозы (DLM), которая должна соответствовать требованиям НТД. Одновременно проводят окрашивание мазка и просмотр под микроскопом с целью контроля чистоты культуры.

Анатоксины

• При накоплении в культуральной жидкости достаточной концентрации экзотоксина, культуральную жидкость с выращенными бактериальными клетками подвергают детоксикации путем добавления 20 % раствора формалина для достижения конечной концентрации 0,5 % - 0,8 % (при условии концентрации формальдегида в формалине не ниже 36 %). Детоксикацию ведут при температуре 37 °С - 40 °С, в течение от 5 - 7 суток до 3 - 5 недель, в зависимости от вида токсина. После чего культуральную жидкость освобождают от бактериальных клеток путем сепарирования, центрифугирования или фильтрации.
• После детоксикации и освобождения от бактериальных клеток анатоксин очищают от компонентов питательной среды и других продуктов метаболизма методами изоэлектрического осаждения, ионного обмена, ультрафильтрации, после чего ресуспендируют до концентрации анатоксина, соответствующей требованиям нормативно-технической документации, контролируют его стерильность, активность в единицах связывания (EU). После чего готовят наиболее рациональные формы анатоксина для применения. По форме анатоксины могут быть приготовлены в виде жидких, сухих, эмульгированных или сорбированных препаратов.
• Наиболее рациональной и эффективной формой изготовления анатоксинов является сорбированный гидратом окиси алюминия, депонированный анатоксин. Сорбируют анатоксин на 3 % гидроксиде алюминия, которого должно быть до 15 % к объему анатоксина. Режим сорбции продолжается 5 - 7 суток при температуре от 5 °С до 8 °С и pH от 5 до 5,5.
• В сорбированном анатоксине кроме контроля полноты сорбции, согласно требованиям нормативно-технической документации на биопрепарат, определяют иммуногенность, стерильность, реактогенность, содержание формальдегида.