Лабораторная работа.
«Выделение дезоксирибонуклеопротеина из ткани зобной железы или селезенки».
Выделение дезоксирибонуклеопротеина (ДНП) из зобной железы основано на том, что ДНП нерастворим в воде, но хорошо растворяется в щелочных и солевых растворах, поэтому при нейтрализации щелочных растворов или при разведении водно-солевых растворов он выпадает в осадок. Обнаружить ДНК в ДНП можно с помощью качественной реакции на дезоксирибозу. Для этого выделенный ДНП нагревают с дифениламиновым реактивом в кислоте. При этом происходит гидролиз ДНП и освобождение дезоксирибозы, которая дает с дифениламиновым реактивом синее окрашивание. Белковый коипонент в ДНП можно обнаружить с помощью биуретовй реакции.
1.Выделение ДНП. 0,5г зобной железы или селезнки растирают в фарфоровой ступке со 100мг стеклянного порошка, постепенно добавляя небольшими порциями 15мл 5%-ного раствора хлорида натрия. Фильтруют содержимое ступки через марлевый фильтр. Затем в стакан наливают 80 – 90мл дистиллированной воды и медленно,при помешивании стеклянной палочкой, вливают в воду полученный фильтрат. Нерастворимый в воде ДНП выпадает в осадок, нити его наматывают в виде комка на стеклянную палочку. Собранную массу ДНП осторожно вынимают вместе с палочкой, переносят в чистую пробирку и растворяют в 1-2мл 0,4%-ного раствора гидроксид натрия (следить за тем, чтобы произошло полное растворение ДНП).
2. Обнаружение ДНК. В пробирку вносят 5 – 10капель раствора ДНК,добавляют в два раза больший объем дифениламинового реактива, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 5 – 10мин. Жидкость постепенно прибретает синее окрашивание, обусловленное реакцией дифениламина с дезоксирибозой.
3. Биуретовая реакция на белковый компонент в ДНП. К 5 – 10каплям раствора ДНП добавляют 10 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия и по 1капле 1%-ного раствора сульфата меди (II). Раствор окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
Практическое занятие № 6.
Тема: Биосинтез белка.
4. Цель:
Дать студентам представление о механизме реализации генетической информации.
Рассмотреть этапы биосинтеза белка и его регуляцию.
5. Задачи.
После проведения занятия студенты должны:
Знать генетический код и его состав;
Знать стадии биосинтеза белка;
Знать строение и функции м-РНК, т-РНК, р-РНК;
Уметь назвать посттрансляционные изменения белка;
Знать структуру и уметь объяснить функционирование оперона;
Уметь перечислить и назвать механизм действия ингибиторов синтеза белка.
Do'stlaringiz bilan baham: |