Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Реакция на компоненты нуклеопротеинов в гидролизате дрожжей»
Нуклеиновые кислоты в клетке находятся в виде нуклеопротеиновых комплексов, которые рассматриваются как сложные белки, простетической группой которых являются нуклеиновые кислоты. Для качественного анализа химического состава нуклеопротеинов может быть использован гидролизат дрожжей как объект, богатый нуклеопротеинами.
При частичном гидролизе нуклеопротеины распадаются на белок (протамины или гистоны) и нуклеиновые кислоты. При полном гидролизе нуклеиновые кислоты распадаются на составляющие их компоненты по схеме:

	Нуклеиновые кислоты (полинуклеотиды)
	Мононуклеотиды
Пуриновые или пиримидиновые Основания	Рибоза или дезоксирибоза	Фосфорная кислота

Для изучения компонентов нуклеопротеинов удобно использовать растительный объект – пекарские дрожжи. Продукты кислотного гидрализа нуклеопротеинов могут быть обнаружены специфическими реакциями: буретовой реакцией обнаруживают наличие полипептидов в гидролизате, пуриновые основания дают специфическую реакцию образования осадка солей серебра, фосфорную кислоту обнаруживают по реакции с молибдатом аммония, рибозу или дезоксирибозу – с помощью реакции Троммера.
Ход работы. 1. Гидролиз. В широкую пробирку для гидролиза помещают 0,5г свежих пекарских дрожжей и заливают 4мл 10%-ного раствора серной кислоты. Пробирку закрывают пробкой, в которую вставлен обратный холодильник (стеклянная трубка длиной 25-30 см), и ставят на песчаную баню или асбестовую сетку.
Через 1ч после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, дают содержимому пробирки остыть и фильтруют через бумажный фильтр. В фильтрате открывают продукты гидролиза нуклеопротеинов качественными реакциями на компоненты нуклепротеинов.
2. Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель10%-ного раствора NaOH и 1 каплю 1%-ного раствора сульфата меди(II). Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.
3. Серебряная проба на пуриновые основания. 10 капель гидролизата нейтрализуют 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1%-ного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 мин выпадает небольшой рыхлый осадок серебряных соединений пуриновых оснований (аденина, гуанина), окрашенный в бурый цвет.
4. Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу. К 5 каплям гидролизата добабляют 10 капель 30%-ного раствора NaOH и 1-3 капли 7%-ного раствора сульфата меди(II) до появления неисчезающей мути гидроксида меди(II). Жидкость перемешивают и верхний слой ее нагревают до начала кипения. Выпадает красный осадок оксида меди(II) или желтый осадок гидроксида меди(II) вследствие окисления рибозы и вoсстанавления Cu(OH)₂ до Сu₂О.
5. Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К 20 каплям молибденового реактива (раствор молибдата аммония в азотной кислоте) добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на открытом огне. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает желтый кристаллический осадкок комплексного соединения фосфорномлибденового аммония:
12(NH₄)₂МоО₄ + Н₃РО₄ + 21НNO₃ → (NH₄)₃РО₄∙12МоО₃ + 21NH₄NO₃ + H₂O
фосфорномолибде-
новый аммоний