Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Количественное определение остаточного азота крови».
Остаточный азотом крови називают небелковый азот, т.е. азот органических и неорганических соединений, который остается в растворе после осаждения белков крови. В норме содержание остаточного азота равно 0,2-0,4 г/л. Около 50% его приходится на азот мочевини, 25%-на азот аминокислот, 7,5%-на креатинин и креатин, 0,5%-на аммонийные соли и индикан, 13% остаточного азота приходится на долю остальных азотистых веществ крови, содержание которых в крови варьирует.
Как правило, повышение остаточного азота обусловлено нарушением нормальных взаимоотношений между образовнием и выведением продуктов азотистого метаболизма из организма. Увеличние концентрации остаточного азота в крови свыше 0,4-0,5г/л называется азотемией. Это состояние називается задержкой выведения азотистых веществ или усиленном их образовании(при заболеваниях печени исердца). Поэтаму определение остаточного азота является важным клиническим тестом.
При определении остаточного азота крови безбелковый фильтрат, полученный после осаждения белков сыворотки крови, сжигают с серной кислотой. При этом азот всех органических соединений переходит в сульфат аммония. Образовавшаяся аммонийная соль при взаимодейсвии с реактивом. Несслера дает желтое окрашевание, интенсивность которого сравнивают в колориметре с окраской стандартного раствора содержашего известное количества азота.
Ход работы. В пробирку наливают из бюретки 2,8 мл реактива для осаждения белка. Микрокипиткой набирают 0,2 мл реактива для сыворотки крови и вносят в пробирку. Перемешивают содержимое пробирки, по выдувая ее обратно. Пробирку оставляют стоять на столе 7-10 мин для осаждения белков, затем фильтруют в сухую пробирку.
2. Пипеткой переносят 0,5 мл фильтрата в термостойкую пробирку и добавляют 5 капель концентрированной серной кислоты. В контрольную пробирку добавляют в место фильтрата 0,5 мл дистиллированной воды, 5 капель серной кислоты.
3. Для минерелизации органических веществ пробирки помешают на песчаную баню. При сжигании пробирки должны только касаться верхнего слоя типа, так как в результате перегрива азота может выделяться в свободном виде. Пробирки нужно размешать на бане в наклонном положении во избежение разбрызгивания.
4. При нагревании содержимого пробирок сначала испаряется вода, затем появляется белые тяжелые пары и исследуемая жидкость темнееть. Прибирки снимают с бани, охлаждают, в каждую добавлепо 2 капли пероксида водорода и снов помешают на баню, нагревают 2-3 мин. Жидкость должна быть бесцветной.
5. После охлаждения в пробирки добавляют по 10 мл дистиллированной воды и нейтрализуют 50%-ным раствором NaOH до слабощелочной реакции по лакмусу (приблизительно 0,3 мл). лакмус меняет красную окраску на синюю. Излишек щелочи вызывает помутнене раствора.
6. В обе пробирка добавляют по 0,5 реактива Несслера. Содержимое пробирок окрашивается в желтый цвет разной интинсивности в зависимости от содержания азота.
7. Оптыческую плотность испытуемой пробы измеряют на ФЭКе против контрольной с синим светофильтром. Содержние остаточного азота определяют по колибровочный кривой.