Структура и функции белков и пептидов

Матрица 3
`
ГЦАТТГГГААЦ
Ц
Матрица 5
`
Праймер 5
`
ЦГТА 3
`
Г
А
Т
Ц
dНТФ +
ddГТФ
dНТФ +
dd ТТФ
dНТФ +
dd ЦТФ
dНТФ +
dd АТФ
Г
Г
Т
Т
Т
Ц
А
Ц
Ц
Рис. 19.1.
 
Протокол секвенирования по Сэнджеру 
Во все пробы добавляют радиоактивно меченый «нормальный» дНТФ, либо исполь-
зуют меченый праймер, чтобы можно было по окончании синтеза обнаружить продукты ре-
акции. Разделяют полученные фрагменты методом электрофореза в геле, при этом неболь-
шие синтезированные молекулы проходят дальше, а крупные остаются ближе к линии старта 
(вверху). После ауторадиографии (проявки геля) «читают» полученную электрофореграмму 
снизу вверх и определяют, в какой последовательности ДНК-полимераза включала нуклео-
тиды в растущую цепь. Последовательность нуклеотидов в исследуемой молекуле ДНК лег-
ко установить (она комплементарна той, которую синтезировала ДНК-полимераза). 
В настоящее время можно проводить реакцию в одной пробирке, используя флюорес-
центные метки разных цветов для четырех типов ддНТФ. Методика автоматизирована и поз-
воляет быстро и эффективно расшифровывать довольно большие геномы.
Блот-анализ ДНК (Саузерн-блот) 
В геноме человека уже открыты гены и установлены последовательности, отвечаю-
щие за развитие муковисцидоза, гемофилии, серповидноклеточной анемии, болезни Альц-
геймера, семейной гиперхолестеролемии, болез-
ни Гоше и др. Саузерн-блот позволяет диагно-
стировать такие наследственные заболевания 
путем обнаружения в геноме «дефектных» ге-
нов, отвечающих за их развитие. В основе мето-
да лежит технология гибридизации (образование 
гибридов зонд – мишень). Зондом служит одно-
цепочечная молекула ДНК, меченная радиоак-
тивным Р
32 
и комплементарная искомому гену 
Этапы проведения Саузерн-блота: 

выделение ДНК из биологического 
материала; 

разрезание ДНК на более мелкие 
фрагменты с помощью рестриктаз; 

---

96 
