15.2
. Определение бактерий группы кишечных палочек
(БГКП) в пищевых продуктах
Определение БГКП в пищевых продуктах проводят в соответ-
ствии с ГОСТ Р 50474–93. Продукты пищевые. Методы выявления
и определения количества бактерий группы кишечной палочки (ко-
лиформных бактерий).
Метод определения БГКП основан на обнаружении образова-
ния газа и кислоты при высеве определенного количества продукта
(или смыва с его поверхности) в жидкие питательные среды, содер-
жащие лактозу (среда Кесслера) с последующим подтверждением
принадлежности выросших микроорганизмов к группе кишечных па-
лочек по морфологическим и культуральным признакам.
Исследование на наличие БГКП проводят в несколько этапов:
I э т а п – приготовление разведений продукта. Если продукт
плотный (колбаса, сыр, масло, творог и др.), то результат выражают
в отсутствии БГКП в определенной его массе (г). Если продукт жид-
кий (молоко, кисломолочные напитки, сок и т.д.), то БГКП должны
отсутствовать в определенном его объеме (см
3
или дм
3
).
II э т а п – посев определенного количества продукта или его
разведений в среду Кесслера. Среду Кесслера разливают в пробирки
или колбы, в которые помещают поплавок (стеклянная трубочка
123
с одним запаянным концом). После стерилизации поплавок должен
быть заполнен средой.
В пробирки со средой Кесслера вносят по 1 см
3
соответствую-
щего разведения продукта (10
–1
;
10
–2
;
10
–3
)
и ставят в термостат при
температуре (37±1) ºС. Через 24 ч инкубации посевы просматривают
и отмечают образование газа в поплавке и изменение цвета среды из
фиолетового в желто-зеленый. Записывают, в каких разведениях
произошло газообразование.
III э т а п – подтверждение принадлежности микроорганизмов,
выросших на среде Кесслера, к БГКП. Из забродивших пробирок со
средой Кесслера делают пересев петлей на поверхность плотной сре-
ды Эндо таким образом, чтобы получить изолированные колонии.
Для этого дно чашки Петри расчерчивают карандашом по стеклу на
4–8 секторов. Из каждой пробирки делают посев на отдельный сек-
тор. Бактериологической петлей из пробирки берут минимальное ко-
личество исследуемого материала и высевают его в секторе зигзаго-
образным штрихом, не отрывая петлю от поверхности агара и не
нарушая его целостности. Чашки Петри подписывают и помещают
на 18–24 ч в термостат (крышками вверх) с температурой 37±1 ºС.
После инкубации чашки просматривают. Бактерии группы
кишечной палочки образуют на среде Эндо красные или розовые
блестящие колонии с металлическим блеском или без него. Такой ха-
рактер роста на среде Эндо эти бактерии дают за счет сбраживания
лактозы и образования кислоты, вызывающей восстановление инди-
катора фуксина, окрашивающего колонии в красный цвет.
Из типичных колоний на среде Эндо готовят препараты, окра-
шивают их по Граму и микроскопируют. Если в препарате обнаружи-
ваются мелкие грамотрицательные неспорообразующие палочки, то
одновременно ставят оксидазный тест. Заключение о том, что обна-
руженные в продукте микроорганизмы относятся к БГКП, делают на
основании выявления в посевах грамотрицательных, не образующих
спор палочек, сбраживающих лактозу с образованием кислоты и газа
при температуре 37±1 ºС с отрицательным тестом на оксидазу. При
этом указывают массу навески продукта (в г) или его объем (в см
3
).
В случае отсутствия на среде Эндо типичных для БГКП колоний
продукт считают не загрязненным кишечными палочками.
124
Do'stlaringiz bilan baham: |