O’zbеkistоn rеspublikasiоliy va o’rta maхsus ta’lim vazirligi urganch davlat univеrsitеti tabiiy fanlar fakulteti

Disk elektroforezi.
PAAGdagi elektroforez ko'pincha disk elektroforezi deb ataladi. Bu nom inglizcha ikkita so'zdan kelib chiqqan - uzilish, bu holda elektroforetik muhitning heterojenligini bildiradi va diskoid - disk shaklida. Gap shundaki, tasodifan, tajribaning standart sharoitida ajratilgan zonalar disklar shakliga ega.
Disk elektroforezi pH, gel konsentratsiyasi va kuchlanish gradientining bosqichma-bosqich o'zgarishi bilan tavsiflanadi. Ma'lumki, nayning pastki qismi ajratiladigan molekulalarga nisbatan molekulyar elak vazifasini bajaradigan teshiklari bo'lgan ajratuvchi jel bilan to'ldirilgan. Ajratuvchi jelning tepasida konsentratsiyali gel joylashgan bo'lib, u katta teshiklarga ega va shuning uchun molekulyar elakning xususiyatlariga ega emas va undan yuqoriroqda guvoh sifatida ishlatiladigan namuna va bo'yoqni o'z ichiga olgan boshlang'ich jel mavjud. Disk elektroforezining maqsadi juda tor boshlang'ich zonani yaratishdir, bu esa yuqori aniqlikni ta'minlaydi. Bunga qanday erishiladi?
Gap shundaki, elektrod tamponida ham, konsentratsiyalash jelining buferida ham zaif amin asosi - Tris mavjud, ammo Tris elektrod tamponiga kuchsiz kislotali glitsin (trisglisin buferi, pH = 8,3) qo'shiladi va konsentratsiyalash jeli tarkibida mavjud. Tris-HCl tampon tizimini beradi xlorid kislotasi, pH = 6,7 (6.1-rasm).
PH = 8,3 da glitsin zvitterion (bipolyar ion) shaklida bo'lib, faqat 5% glitsinat anioniga to'g'ri keladi. Elektr maydonida yuqori rezervuardan kontsentratsion gelga o'tadigan glitsinat ionlari xlorid ionlariga qaraganda ancha past harakatchanlikka ega va shuning uchun ularning orqasida "izlanadi". Yuqori gel muhitida pH=6,7 da glitsinat ionlarining harakatchanligi yanada past bo`ladi, chunki qo`shimcha protonlanish natijasida zvitterionlar (glisinning izoelektrik nuqtasi) soni ortadi. Xlor ionlari, aksincha, juda tez harakat qiladi va bu ikki turdagi ionlar o'rtasida interfeys paydo bo'ladi. Xlor ionlari ham, glitsinat ionlari ham bir xil elektr tizimining bir qismi bo'lganligi sababli, kamroq harakatlanuvchi glitsinat ionlarining lokalizatsiyasi hududida kuchlanish kuchayadi va ko'proq harakatlanuvchi xlor ionlari hududida pasayadi. Binobarin, orqadagi ionlar yetakchilarga yetib olishga intiladi va harakatchanligi boʻyicha oraliq boʻlgan oqsil anionlari birinchi va oraliqda joylashadi ikkinchi ionlar. Natijada, oqsil anionlari etakchi ionlar orqasida to'plangan. Xlorid ionlari ortidan ajratuvchi jelga yaqinlashadigan nihoyatda tor oqsil tasmasi hosil bo‘ladi.



Keyingi glitsinat ionlari pastki gelga yetib borishi bilan ularning soni va harakatchanligi pH = 9,5 glisin pK ga yaqinlashganda ortadi. Endi glitsinat ionlarining harakatchanligi oqsil anionlariga qaraganda yuqori bo'ladi, ularning harakatchanligi molekulyar elak effekti tufayli ajratuvchi gelda sekinlashadi. Glitsinat ionlari barcha oqsil molekulalarini bosib o'tadi va xlor anionlarini ortda qoldiradi. Oxirgi xlorid ioni pastki geldan chiqishi bilanoq, pH ko'tariladi, chunki xlorid ionlari ko'proq asosiy glitsinat ionlari bilan almashtiriladi va asl Tris-HCI bufer tizimi o'rniga tris-glisin buferi hosil bo'ladi. Natijada, oqsil anionlarining manfiy zaryadi ortadi va ularning harakati zaryad / massa nisbati qiymatlariga muvofiq sodir bo'ladi.