|
TEST SAVOLLARI
Nafas olish jarayonining mohiyati nimada? U o'simlik hujayrasida qanday vazifani bajaradi?
P. Boysen-Jensen bo'yicha nafasni aniqlash tamoyili qanday?
Nafas olish koeffitsienti nima?
Nafas olish koeffitsientining qiymatini nima aniqlaydi?
Nafas olish koeffitsientlari quruq va unib chiqqan urug'lar o'rtasida farq qiladimi?
Enzimatik nafas olish tizimlari
Nafas olish jarayonida substratlarning oksidlanishi oksidlovchi fermentlar ishtirokida sodir bo'ladi. Oksidlanishning birinchi bosqichi dehidrogenazlar - nafas olish substratining dehidrogenatsiyasini katalizlovchi fermentlar tomonidan amalga oshiriladi. Ular tomonidan faollashtirilgan vodorod keyin o'tkaziladi
boshqa fermentlar (oraliq vodorod tashuvchilar) yoki oxirgi qabul qiluvchiga.
Namunaviy tajribada oksidlangan holatda rangli va qaytarilgan holatda rangsiz bo'lgan sun'iy qabul qiluvchilar (natriy diklorofenolindofenolat (DCPIP), metilen ko'k) va aksincha, oksidlangan holda rangsiz bo'lgan tetrazoliy tuzlari va qisqartirilgan holatda rangli, foydalanish mumkin.
Oksidlanishning terminal bosqichi molekulyar kislorodni faollashtiruvchi oksidazalar tomonidan katalizlanadi. Protez guruhlari tarkibiga kiradigan metallning tabiatiga ko'ra oksidazalar ikki guruhga bo'linadi: temir oqsillari (sitoxromlar, peroksidaza, katalaza) va mis oqsillari (polifenoloksidaza, askorbin oksidaza).
Tajriba 1.Umumiy dehidrogenaza faolligini aniqlash
Ish jarayoni.Dehidrogenaz faolligini qiyosiy aniqlash uchun bug'doy ildizi va barglarining 0,5 g qismini olish kerak. O'simlik to'qimalari 5 ml 0,87% K2HPO4 eritmasi bilan maydalanadi va alohida probirkalarga o'tkaziladi, kislorod kirishini to'xtatish uchun 1 ml 10-4 M bo'yoq eritmasi - natriy diklorofenolindofenolat va ozgina yog' qo'shiladi. Dehidrogenazlarning faolligi bo'yoqning rangsizlanish tezligi bilan baholanadi. Natija nisbiy birliklarda ifodalanadi va formula bilan hisoblanadi
E LEKIN100 ,
DA G
bu erda E - dehidrogenazalarning faolligi, nazarda tutiladi. birliklar; A - bo'yoq miqdori, ml;
DA– oqartirish vaqti, min; G - menteşe, g.
Tajriba 2.Dehidrogenaza faolligini gistokimyoviy aniqlash
Ish jarayoni.3 ml eritmasi (0,87% K2HPO4 da 0,1% tetrazoliy tuzlari) solingan probirkalarga no‘xat ildizlarining turli qismlarining kesmalari solinadi va xona haroratida 30 daqiqaga qoldiriladi. Shundan so'ng, bo'laklarni olib tashlang va
mikroskop ostida ko'rish. Rang intensivligiga ko'ra turli ildiz to'qimalarining dehidrogenaza faolligiga qiyosiy tavsif berish.
Tajriba 3.Ildiz va barg peroksidaza faolligini solishtirish
Peroksidaza- vodorod peroksid yoki organik peroksidlar yordamida substratlarning oksidlanishini katalizlovchi ferment. Ortiqcha oksidlanishni amalga oshiradi; bundan tashqari, vodorod periksni ishlatib, ferment antioksidant tizim sifatida ishlaydi.
Fermentning protez guruhi temir porfirindir.
Ish jarayoni.50 mg ildiz va barglar namunalarini oz miqdorda asetat buferi (pH = 5,4) bilan ohak bilan maydalang. Olingan massani 25 ml hajmli o'lchov kolbalariga o'tkazing va bu bufer bilan belgiga keltiring, xona haroratida 15 daqiqa ushlab turing. Keyin olingan eritmalarni 3000-4000 rpm tezlikda 5 daqiqa davomida santrifüj qiling yoki filtrlang va ferment faolligini aniqlash uchun foydalaning. Peroksidaza fermentining faolligi oksidlangan substratning (benzidin) ko'k rangini oldindan belgilangan optik zichlikka qadar hosil bo'lish vaqti bilan baholanadi.
FEC ta'rifi.Qatlam qalinligi 2 sm bo‘lgan 2 kyuvetaning har biriga 2 ml ekstrakt, 2 ml bufer eritma va 2 ml benzidin eritmasidan quyib, fotoelektrik kolorimetrning (FEK-M) ushlagichiga soling. : biri chapda (nazorat), ikkinchisi o'ngda (tajriba). To'g'ri o'qish barabanini optik zichlikning nolga bo'linishiga (qizil shkala) o'rnating. Qizil yorug'lik filtri bilan ikkala yorug'lik oqimini muvozanatlash uchun optik takozlardan foydalaning, galvanometr ignasini nolga keltiring. Shundan so'ng, o'ng o'qish tamburini 0,250 bo'linmasiga o'rnating, galvanometr ignasi esa yon tomonga siljishi kerak. Chap nazorat kyuvetasiga 2 ml suv quying va tezda o'ngga quying (burni singan pipetka yordamida)
2 ml 0,03% vodorod periks eritmasi. Peroksid eritmasining birinchi tomchisi bilan sekundomerni ishga tushiring va galvanometr ignasi nolga o'rnatilgan vaqtga e'tibor bering. Bu vaqt benzidinning ko'k oksidlangan shaklini hosil qilish tezligi bilan belgilanadi. Rangni rivojlantirish uchun optimal vaqt 7-40 s. Ferment faolligi (Af) formula bo'yicha hisoblanadi
E A B Bilan
f
LEKIN t d ,
bu yerda Af - fermentning faolligi, arb. birliklar; E - so'nish (0,25);
LEKIN- ekstraktni tayyorlash uchun olingan suyuqlik miqdori nisbati (in
ml), namunaning vazni, g;
DA– qo‘shimcha suyultirish darajasi;
Bilan- doimiy suyultirish darajasi (kyuvetada ekstraktsiya), bu holda 4 ga teng;
ttajriba vaqti, s;
dsuyuqlik qatlamining qalinligi (2 sm).
Do'stlaringiz bilan baham: |
