Основные хроматографические параметры

Natriy dodesil sulfat ishtirokida poliakrilamid gel elektroforezi

• Usul zaryadlangan zarrachalarning (molekulalarning) elektr maydoni ta'sirida harakat qilish xususiyatiga asoslangan.
• Odatda, migratsiya tezligi tahlil qilinadigan oqsillarning uchta parametriga bog'liq: molekulalarning kattaligi, molekulalarning shakli va umumiy zaryad.
• Shuning uchun oqsillar migratsiya tezligi faqat molekulyar og'irlikka bog'liq bo'lishi uchun oldindan denatüratsiya qilinadi.
• Buning uchun tahlil qilingan aralashma natriy dodesil sulfat [SDS (SDS)] (C) bilan ishlanadi.12H25OSO3Na), kuchli amfifil xususiyatlarga ega bo'lgan yuvish vositasi.

• Hozirgi vaqtda natriy dodesil sulfat (SDS) [SDS-PAGE elektroforezi (SDS-PAGE)] ishtirokida poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) oqsil preparatlarining bir xilligini aniqlashning keng tarqalgan usuli hisoblanadi.

Natriy dodesil sulfat ishtirokida poliakrilamid gel elektroforezi

• SDS ta'sirida oligomerik oqsillar subbirliklarga ajraladi va denatüratsiyalanadi.
• Ochilmagan polipeptid zanjirlari SDS ni (taxminan 0,4 g/g oqsil) bog'laydi va manfiy zaryad oladi.
• To'liq denatürasyon uchun muhitga tiollar qo'shiladi, ular disulfid ko'priklarini kesib tashlaydi (1).

Elektroforegrammalar

• Elektroforez nozik bir qatlamda amalga oshiriladi poliakrilamid (2).
• Elektroforez tugagandan so'ng, oqsil bantlari bo'yoq yordamida aniqlanadi.
• Misol tariqasida, 3-sxemada uchta preparatning elektroforegrammasi ko'rsatilgan:
• yuzlab oqsillarni o'z ichiga olgan hujayra ekstrakti (a);
• bir hil oqsilning ekstraktidan ajratilgan (b);
• molekulyar og'irliklari ma'lum bo'lgan oqsillarni nazorat qilish aralashmasi (c).