Определение активности ферментов алт и аст. Конечная точка или кинетика

Определение активности ферментов АЛТ и АСТ. Конечная точка или кинетика.

• Кафедра клинической лабораторной диагностики
• Доц. БОРЗОВА Н.С.

Методы определения АЛТ и АСТ

• В 1965 году в Республике Узбекистан был внедрен метод определения по Райтману и Френкелю (1957 г.) вместо метода Тангази, Уайт, Умбрайт в модификации Пасхиной (1950 г.)

продолжение

• Метод Райтмана, Френкеля основан на определении гидрозона пировиноградной кислоты после остановки реакции 2,4 дигидрофенилгидрозоном.
• По последним литературным данным метод Райтмана,Френкеля по конечной точке отнесен к разряду исторических, а вместо него предложен кинетический метод

продолжение

• При определении ферментов по конечной точке (Райтман, Френкель) скорость реакции переаминирования (как и других ферментных методов) зависит от многих факторов:
• Концентрации фермента
• Концентрации субстрата
• Увеличения скорости обратной реакции в результате накопления продуктов прямой реакции (ретроингибирования).

продолжение

• В кинетическом методе измеряется начальная скорость реакции. При этом легко выявляются нарушения линейности протекания реакции, т.е. возможные погрешности аналитической стадии.
• При высокой активности фермента прослеживается истощение субстрата в ходе реакции, которую повторяют после разведения образца.

продолжение

• В кинетическом методе фермент находится в одинаковых условиях на протяжении всего процесса измерения (пробы не переливаются из пробирки в пробирку), что существенно влияет на стабильность результата.
• В наборах реагентов для кинетики используются более чистые реактивы, в них отсутствуют ингибиторы ферментов.

продолжение

• При кинетических исследованиях резко уменьшается объем реакционной смеси, соответственно снижается объем сыворотки, уменьшается стоимость реактивов.
• Измерение происходит за 2-3 минуты, что принципиально для отделения реанимации и интенсивной терапии.