Mirzo Ulug’bek nomidagi O’zbekiston Milliy Universiteti Biologiya fakulteti Biologiya yo’nalishi 20-01 guruh talabalari Rajabova Dilshoda va Qodiraliyeva Nozimaxonning Genomika fanidan

2. Cheklangan fragment uzunligi polimorfizmi (RFLP):

• 2. Cheklangan fragment uzunligi polimorfizmi (RFLP):
• Bu sud tibbiyoti kabi turli sohalarda DNKni tahlil qilish uchun qo'llaniladigan birinchi usullardan biri edi.
• Bu gibridizatsiyaga asoslangan texnikadir.
• Uni 1984 yilda ingliz olimi Alek Jeffreys genetik kasalliklar bo'yicha tadqiqotlari davomida ixtiro qilgan.
• RFLP maxsus cheklovchi endonukleaza fermentlaridan foydalanadi, ular o'ziga xos joyda kesadi va turli uzunlikdagi bo'laklarni va qiziqish bo'lagini beradi.
• Aniq bo'laklarning uzunligi blotlash yordamida aniqlanadi, endi ketma-ketlik bilan almashtiriladi.
• RFLP markerlari asosan lokalizatsiyaga xos bo'lib, qo'llaniladigan cheklash endonukleazasining tabiati tufayli tabiatda dominantdir.
• RFLP uchun qadamlar quyidagicha:
• DNK ekstraktsiyasi tupurik, qon yoki boshqa namunalardan amalga oshiriladi va tozalanadi.
• Cheklovli endonukleazlar tozalangan DNKni hazm qiladi, natijada cheklov fragmentlari hosil bo'ladi.
• Endi cheklash fragmentlari gel elektroforez yordamida tekshiriladi.
• Endi DNK bantlarining ko'rinishi uchun jel lyuminestsent bo'yoqlar bilan ishlanadi.
• Ahamiyati:
• RFLP genetik barmoq izlari/profillash uchun qo'llaniladigan birinchi usullardan biri edi.
• U irsiy kasalliklarni, bu kasalliklarning tashuvchisini aniqlash, genetik xaritalash va geterozigotani aniqlash uchun ishlatiladi.
• RFLP ning molekulyar asosi shundan iboratki, har qanday nuqta mutatsiyalari, masalan, o'chirish, almashtirish va qo'shish yoki genom ichidagi duplikatsiyalar, inversiyalar kabi o'zgarishlar yangi cheklash joylarini yo'q qilishi yoki yaratishi mumkin. Genomdagi bu o'zgarishlarni cheklovchi endonukleaza fermenti bilan hazm qilingan o'zgaruvchan uzunlikdagi fragmentlarni tahlil qilish orqali aniqlash mumkin.
• Kamchiliklari:
• nisbatan katta DNK namunasini talab qiladi
• mashaqqatli va mashaqqatli jarayon
• sezgirlik va ifloslanish uchun ko'proq ehtiyot choralari talab qilinadi