Mikropreparatni tayyorlash texnikasi

MIKROPREPARATNI TAYYORLASH TEXNIKASI.

Preparatni tayyorlash xom ashyoning morfologik guruhiga va uning holatiga bog'liq - butun, kesilgan, chang.

Barglari. Yuzaki mikropreparatlar ingichka barglardan tayyorlanadi. Barcha xom ashyoni tekshirganda, qirrasi va tomirlari bo'lgan barg pichoqlarining qismlari olinadi, mayda barglar butun bo'lib olinadi.

Bir nechta xom ashyo chinni idishga joylashtiriladi, 5% natriy gidroksid eritmasi suv bilan suyultiriladi (1: 1) va bir-ikki daqiqa qaynatiladi. Keyin tarkib Petri idishiga quyiladi, suyuqlik drenajlanadi va xom ashyo suv bilan yaxshilab yuviladi. Xom-ashyo suvdan skalpel yoki ajratuvchi igna bilan chiqariladi, shisha slaydga joylashtiriladi, qolgan suv filtr qog'ozi bilan chiqariladi va xlorli gidrat yoki glitserin eritmasidan tomchi qo'llaniladi. Shundan so'ng, xom ashyoning bir qismi skalpel yoki ajratuvchi igna bilan ikki qismga bo'linadi, ulardan biri ehtiyotkorlik bilan aylantiriladi. Ob'ekt qopqoqli stakan bilan qoplangan, havo pufakchalarini olib tashlash uchun ozgina isitiladi va sovutgandan so'ng, har ikki tomondan varaqni mikroskop ostida ko'rib chiqing.

Qalin teridan tikilgan barglarni tekshirganda tasavvurlar tayyorlanadi. Buning uchun quruq barglar suvga namlanadi, so'ngra suv, alkogol va glitserin aralashmasiga joylashtiriladi (1: 1: 1). Kesmalar yumshatilgan varaqdan tayyorlanadi. Quruq barglarni yumshatish uchun ularni 10-20 daqiqa davomida qaynatish ham mumkin.

Kesilgan xom ashyoni tekshirganda, xuddi shu tarzda mikropreparatlar tayyorlanadi.

Barg kukunlarini tekshirganda shisha slaydga 2-3 tomchi xloral gidrat surtiladi, ularning ichiga oz miqdordagi sinov kukuni solinadi, chang dissotsiatsiyalangan igna bilan aralashtiriladi, qopqoqli stakan bilan yopiladi va barg to'qimalarini tozalash uchun 2-3 daqiqa davomida isitiladi. Aniqlanish uchun siz 3% NaOH eritmasini ham olishingiz mumkin. Isitish paytida tayyorgarlik qurib ketmasligi uchun ehtiyot bo'lish kerak. Isitgandan so'ng, qopqoq oynasi ob'ekt oynasiga nisbatan engil surtiladi, shunda chang zarralari bir-birlarini yopmasdan yupqa qatlamda yotadilar. Agar NaOH antireflektiv suyuqlik sifatida ishlatilgan bo'lsa, glitserin qopqoq slipi ostiga tortilishi uchun ularni 1-2 tomchi glitserin qo'shing.

Gullar.Gullardan va inflorescencesdan mikropreparatlar tayyorlash uchun sinov materiallari oldindan suvda 2-3 daqiqa qaynatiladi (ba'zida buning uchun 2-3% NaOH eritmasi ishlatiladi, bu holda qaynatilgandan keyin material suv bilan yaxshilab yuviladi). Alohida gullar yoki ularning qismlari shisha slaydga tarkibidagi suyuqlikning bir tomchisiga qo'yiladi, qopqoqli stakan bilan qoplanadi va tayyorgarlik yuzadan tekshiriladi.

Grass.Maysalarni aniqlash asosan barglar asosida amalga oshiriladi, shuning uchun barglar ko'pincha mikroskopik tahlil qilish uchun ishlatiladi. Tayyorgarlik uchun yuqoridagi rasmga qarang.

Bargsiz o'tlarni o'rganishda ildiz epidermis va kesma qismlari tayyorlanadi. Epidermis suv bilan seyreltilmiş 5% NaOH eritmasida (1: 1) oldindan qaynatilgandan so'ng skalpel bilan olib tashlanadi. Kesimlarni tayyorlash uchun, jarohatlar oldindan yumshatilgan (yumshatish usullari barglar bilan bir xil).

Kesilgan o'tlarni tekshirganda eng katta barglar va jarohatlaydi. Ba'zida ezilgan preparatlar jarohatlaydi. Buning uchun jarohatlangan qismlar yumshoqlik uchun 3-5% NaOH eritmasida qaynatiladi va skalpel bilan shisha slaydda maydalanadi. Olingan massa glitserin yoki xlorli gidratga joylashtiriladi va qopqoqli stakan bilan yopiladi. Bunday preparatlarning mikroskopik surati bo'ylama qismlarga o'xshaydi.

Mikropreparatlar o'tlarning changlaridan barglarning kukunlari singari tayyorlanadi.

Er osti organlari.Er osti organlarini mikroskopik tahlil qilish uchun, odatda, uzunlamasına kesishmalar tayyorlanadi. Birinchidan, ildizlar, rizomlar yoki boshqa er osti organlari namlanadi. Buning uchun ildizning yoki boshqa er osti organining kichik bo'laklari sovuq suvga joylashtiriladi va taxminan bir kun ushlab turiladi, so'ngra alkogol va glitserin aralashmasiga (1: 1) 3-5 kun davomida uzatiladi. Yupqa ildizlarning kesma qismlari butun ildiz diametridan o'tishi kerak, qalinroq ildizlar, rizomlar va boshqa er osti organlari uchun bir qismni kesish kifoya qiladi ko'ndalang kesim, ammo unda to'qimalar (epidermis) dan boshlab, markaziy qismgacha bo'lgan barcha to'qimalar bo'lishi kerak. Tarkibning umumiy manzarasi past kattalashtirishda tayyorgarlikni, yuqori kattalashtirishda strukturaning tafsilotlarini hisobga olgan holda o'rganiladi.

Tug'ralgan va maydalangan xom ashyo. Ildiz va rizomlarning bo'laklari 3-5% ishqor (yoki suv) eritmasida qaynatiladi. Keyin igna yoki skalpel bilan bo'linib (yaxshisi radial yo'nalishda) va preparatni xlorli hidratda ("ezilgan" tayyorgarlik) ko'rib chiqing. Supero'tkazuvchilar tizimning katta ildizlari va ildizpoyalarida joylashgan joyini aniqlash uchun sinish skalpel bilan tekislanadi, floroglucinolning alkogolli eritmasi bilan namlanadi va bir tomchi konsentrlangan xlorid kislotasi qo'llaniladi. Ksilem elementlari to'q qizil-qizil rangda. "Ezilgan" preparatlarda, aniqlashda arboreal tomirlarning devorlarining ikkilamchi qalinlashishi katta ahamiyatga ega; mexanik elementlarning tarkibida tolalar, kamroq toshli hujayralar va biroz qalinlashgan endoderma hujayralari mavjud. Parenximada ko'pincha kaltsiy oksalat kristallari mavjud. Ba'zida sekretar yo'llar va sutchilar bor.

Kukun. Kichkina miqdordagi kukun (igna uchida) shisha slaydda bir tomchi xloral gidratga kiritiladi, igna bilan bir tekis suspenziya bo'lgunga qadar aralashtiriladi, qopqoqli stakan bilan qoplanadi va kraxmal donalarining tuzilishi tekshiriladi; keyin tayyorgarlik isitiladi va boshqa anatomik elementlarning tuzilishi o'rganiladi. Kukunli xom ashyoni mikroskopik aniqlash asoslanadi anatomik tuzilish to'qimalar va hujayralardagi xarakterli inkluzyonlar (kristallar, kraxmal, inulin, shilliq).

Mikrokimyoviy reaktsiyalar kesilgan va kukunli xom ashyoni tashxislashda muhim o'rin tutadi.

Po'stloq. Korteksni mikroskopik tekshirish uchun odatda tasavvurlar, kamroq uzunlamasına qismlar tayyorlanadi. Bo'laklar oldindan suvda yumshatiladi, so'ngra suv-glitserin-spirt aralashmasiga o'tkaziladi (1: 1: 1). Barcha xom ashyoni yumshatish uchun uni 5-10 daqiqa davomida suvda qaynatish ham mumkin. Po'stloqning yumshatilgan qismlari pichoq yoki skalpel bilan tekislanadi va kesilgan yuzasiga qat'iy perpendikulyar yoki bo'ylama yo'nalishni beradi. Bo'limlar ustara yoki jilet bilan tayyorlanadi. Olingan bo'limlar xlorli gidrat yoki glitserin eritmasiga joylashtiriladi va havoni tozalash va tozalash uchun isitiladi. Agar kerak bo'lsa, turli xil tuzilmalar yoki moddalarni ochish uchun preparatlar bo'yalgan.

Kesimlarni o'rganayotganda, mantar tuzilishining qalinligi va tabiatiga, kollenxima borligiga, birlamchi va ikkilamchi korteks qalinligining nisbati va medullar nurlarining kengligiga e'tibor qaratiladi. Bast tolalari va tosh hujayralar, ularning tuzilishi, joylashishi va soni ham muhimdir.

Elyaflarning tuzilishi va o'lchamlari bo'ylama qismlarda eng yaxshi ko'rinadi. Bundan tashqari, ba'zi o'simliklarning po'stlog'ida sutli idishlar yoki efir moylari bo'lgan idishlar mavjud. Kaltsiy oksalat kristallari deyarli har doim mavjud.

Po'stloq kukunlari ksilem elementlarining yo'qligi bilan ajralib turadi va asosan mexanik elementlar bilan belgilanadi, ular bu erda bitta hujayralar shaklida yoki guruhlarda yoki to'plamlarda yotadi. Kukun mikroskopiyasida kaltsiy oksalat kristallari va mantar parchalari (ayniqsa xarakterli rangga ega bo'lsa) ham katta ahamiyatga ega.

Mevalar, urug'lar. Meva va urug'larni mikroskopik tekshirish uchun sirt tayyorlash va tasavvurlar tayyorlanadi.

Qobiq va perikarp preparatlarini tayyorlash uchun 2-3 urug 'yoki meva urug' yoki meva yuzasidan 2-3 daqiqa davomida 5% NaOH eritmasida qaynatiladi, so'ngra suv bilan yuviladi. Ob'ekt shisha slaydga joylashtirilgan, urug 'yoki perikarp to'qima qobig'i ajratilgan ignalar bilan ajratiladi va xlorli gidrat yoki glitserin eritmasida tekshiriladi.

Dilimlarni tayyorlash uchun quruq mevalar va urug'lar bir kun davomida nam xonaga (suvga bir necha tomchi xloroform qo'shilgan suvsizlantiruvchi vosita) yoki ob'ektning qattiqligiga qarab 15-30 daqiqa yoki undan ko'proq vaqt davomida suv bug'i bilan joylashtirib oldindan yumshatiladi.

Kichik meva va urug'lar 0,5x0,5x1,5 sm o'lchamdagi kerosin blokiga joylashtiriladi.Parafin blokning tor tarafidan qizdirilgan igna uchi bilan eritiladi va urug' yoki meva hosil bo'lgan teshikka botiriladi, ular quruq bo'lishi kerak. Bo'limlar kerosin bilan birga ob'ektlar orqali ustara bilan amalga oshiriladi. Parafin qismlari suyuqlik bilan namlangan, dog 'bilan qoplangan va mikropreparatlar glitserin yoki xlorli gidrat eritmasida tayyorlanadi.

Meva va urug 'kukunlari barglar qismida tavsiflangan tarzda tayyorlanadi. Tozalovchi suyuqlik sifatida xlorli gidrat eritmasi yoki 5% NaOH eritmasi ishlatiladi.

Mikroskop yordamida o'rganilayotgan ob'ektlarga odatda mikroslidlar yoki oddiy tayyorgarlik deyiladi (chunki ularning hammasi ham mikroskopik emas). Mikrobiologiyada, qoida tariqasida, bu mikroskop slayd bo'lib, uning ustida tadqiqot obyekti joylashtiriladi va qopqoq slip bilan qoplanadi. Uning paydo bo'lishi tarixi qiziq: 17-asrning o'rtalarida bunday ko'zoynak sifatida shaffof slyuda qismlari ishlatilgan. Ammo slyuda juda mo'rt bo'lgani uchun ularga zarar etkazish juda oson edi. Eng muhimi shundaki, qopqoq oynalarining o'lchamlari standartlashtirilmagan, shuning uchun dorilarni saqlash haqiqiy azobga aylandi.

Tashish paytida preparatlar yomonlashdi, chunki ularning parchalanishiga yo'l qo'ymaydigan fiksatsiya zaif yoki umuman yo'q edi. Dori vositalarini uzoq muddatli saqlash usullari hali ishlab chiqilmagan. Ushbu muammolarni hal qilish uchun