Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Схема определения чувствительности бактерий к антибиоткам методом серийных разведений.

Ингредиенты	Пробирки
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Контрольбак-терии	Контрольантибиотика
Объём МП бульона мл.	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1
Антибиотик (раствор в составе 100 мкг/мл )	1	─	─	─	─	─	─	─	─	─ *	─	1
Серийное разведение	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	─	─
Концентрация антибиотика мкг/ мл	50	25	12.5	6.2	3.1	1.6	0.8	0.4	0.2	0.1	─	50
Cуспензия бактерий, мл	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	─
Инкубируют в термостате в течение 18-24 часов при температуре 37º С
Результаты	─	─	─	─	─	─	─	-	+	+	+	─

Примечание: *- убрать 1 мл из пробирки, чтобы во всех пробирках было одинаковое количество жидкости. + рост культуры исследуемой бактерии; - нет роста; минимальная ингибирующая концентрация (МИК) антибиотика 0,8 мкг/мл.

Рисунок 28. Определение значения МИК методом разведения в жидкой питательной среде.


Определение чувствительности бактерии к антибиотикам диско-диффузионным методом. Для определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35⁰-37ºС в течение суток учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах.
Определение концентрации антибиотиков в биологических жидкостях человека.
Метод диффузии в агар. Метод основан на сравнении степени угнетения роста тест-микроба определенными концентрациями антибиотика в испытуемом материале (жидкость организма и т.д.) с угнетением его роста известными концентрациями стандарта антибиотика. Подавление роста тест-микроба осуществляется за счет диффузии антибиотика из исследуемого материала в плотную питательную среду. Рабочими стандартами служат специально изготовленные очищенные образцы антибиотиков, активность которых устанавливают по международным стандартным препаратам. Они сохраняются в запаянных ампулах при температуре 4—10° С. На этикетках указано содержание единиц или микрограммов активного вещества в 1 мг препарата.
Антибактериальная активность антибиотиков выражается в единицах действия (ЕД), соответствующих действию определенной весовой части химически чистого препарата на тест-микроб. Для большинства антибиотиков (стрептомицин, антибиотики тетрациклинового ряда, канамицин и т. д.) 1 ЕД соответствует 1 мкг химически чистого препарата, а 1 мг такого препарата содержит 1000 ЕД. Для некоторых антибиотиков единицы действия были введены до получения химически чистых препаратов, в связи с чем их единица действия не соответствует 1 мкг химически чистого вещества (пенициллин, полимиксин, нистатин).
Методом диффузии в агар можно определить концентрацию всех антибиотиков, содержащихся в жидкостях (в крови, спинномозговой жидкости, моче, желчи, асцитической жидкости и т. д.) и тканях организма (в легких, печени, почках, мозге, мышцах и др.).