Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Лабораторная работа. Изучение кислотоустойчивых бактерий при помощи сложных методов окрашивания. Метод Циль-Нильсена
Цель лабораторной работы: Выявление кислотоустойчивых бактерий.
Необходимое оснащение и реактивы: Микроскоп, спиртовка, предметное стекло, лоток, стеклянная подставка, петля, вата , бинтовые шарики, пробирки, пипетки, резиновые перчатки, агаровая культура кислотоустойчивых бактерий в пробирке, 96⁰спирт, набор красок Циль-Нильсена.
Порядок работы (шаги).

№	Выполняемое действие	Техника выполнения	Выполнил точно и до конца (балл)
1	Приготовить мазок из культуры кислотоустойчивых бактерий и зафиксировать		10
2	Наложить на поверхность мазка порезанную на квадратики чистую фильтровальную бумагу. Сверху фильтровальной бумаги нанести несколько капель карболового-фуксина (фукcин Циля)		10
3	Держим над спиртовкой до появления пара-3раза (не должно закипеть)		10
4	После охлаждения препарата бумагу убираем. Не смывая держим мазок под раствором 5% H2SO4 (30 секунд)		10
5	Промывается водой		10
6	Вновь окрашивается -метиленовым-синим (3-5 мин)		10
7	Промывается водой		5
8	Мазок высушивается		5
9	На мазок нанести 1 каплю иммерсионного масла и микроскопировать		15
10	Кислотоустойчивая бактерия по Циль-Нильсену будет окрашен на голубом фоне в красный цвет. Зарисовать увиденное в тетрадь.		15
	ВСЕГО		100

Примечание: Возможные ошибки при окрашивани по методу Бурри-Гинса и Циль-Нильсена, их значение и устранение.

3. 
   В обоих случаях взятия избыточного количества культуры ведёт к не качественному окрашиванию мазка.
   
4. 
   При окрашивании по методу Циль-Нильсена основным дифферецирующим веществом является раствор 5% H₂SO_4. При недостаточном помещении мазка в растворе H₂SO₄ кислотонеустойчивые бактерии не обесцветятся и не потеряют красный цвет. Если больше продержать, то кислотоустойчивые бактерии потеряют окраску фуксином и могут окраситься метиленовым синим. Следовательно, при окрашивании по методу Циль-Нильсена большое внимание уделяется времени наH₂SO₄ .
   
5. 
   Так же при окрашивании по методу Циль-Нильсена необходимо быть осторожным при поднесении мазка к спиртовке до появления пара, потому что, если вместо образования пара у нас закипит фуксин то бактерии начнут распадаться, а если меньше держать, то плохо окрасятся фуксином.