Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №17
«МЕТОДЫ ОЦЕНКИ Т И В-ЛИМФОЦИТОВ. ПРИНЦИП ПРИМЕНЕНИЯ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИЧЕСКОГО МЕТОДА»
Цель лабораторной работы.
-Ознакомление современными способами оценки иммунной статуса
Задачи педагога:
- Напомнить студентам о значении иммунной системой, а именно, Т- и В-лимфоцитов;
- Ознакомить студентов с современными способами оценки клеточной и гуморальной факторов иммунной системы.
Результаты лабораторной работы
Студент должен знать:
- Строение иммунной системы, Т- и В-лимфоциты и их значение
- Методы оценки клеточной и гуморальной системы иммунитета, суть и механизм.
Студент должен уметь:
- Оценивать иммунную систему макроорганизма по результатам цитофлюориметрического метода оценки Т- и В-лимфоцитов
Теоретическая часть
Методы оценки иммунной системы. Развития медицинской иммунологии непосредственно связано с открытием современных способов оценки иммунной системы.
Полная функциональная оценка иммунной системы имеет следующие показатели.
- Состояние Т – и В- системы лимфоцитов
-Естественныхкиллеров
-Клеточная и гуморальная специфическая ответная реакция организма в ответ на внедрение антигена
- факторы резистентности, интерлейкины, интерфероны.
Оценка иммунной системы человека делится на следующие группы:
- Определение общего количества циркулирующих Т – лимфоцитов(Т-розеткообразование с помощью эритроцитов барана, цитотоксический тест – с анти Т-лимфоцитарнойсывороткой, иммуномагнитная регистрация маркеров СД3, СД11, цитофлюориметрический метод)
-Определение митогенной активности Т- лимфоцитов методом бластрансформации, с помощью ФГА .
- Определение субпопуляции Т-киллеров и –супрессоров, которые управляют количеством Т-лимфоцитов в крови (образование розеток IgM и IgG при нагрузке их на эритроциты, проточный цитофлюориметрический метод с применением СД4 и СД8)
- Определение количества и активности В-лимфоцитов (ЕАС-РОК, иммунофлюресценция с антиглобулиновыми антителами, ЕМ-РОК, ,цитофлюориметрический метод с применением СД19 и СД20)
-Определение функциональной активности В-лимфоцитов (реакция В-бластрансформации с митогеном ЛПС, количество иммуноглобулинов G, M, A, E, D, синтез иммуноглобулинов invitro)
-Определение функциональной активности естественных киллеров.
- Клеточная .эффекторная реакция против антигенов (фактор ингибирующий миграцию, киллерная активность Т-лимфоцитов, антигенсвязывающие лимфоциты)
- Оценка интенсивности гиперчувствительности немедленного и замедленного действия.
-Изучение эффекторной реакции гуморальной системы, изучая выработку различных антител.
- Определение неспецифической резистентности (фагоцитоз, активность комплемента, функциональная активность тучных клеток, количество эозинофилов, базофилов).
- Определение цитокинов и растворимых рецепторов (интерлейкины, интерфероны)
- Иммуногистологические исследования
- Исследования с помощью иммуногенетических антисывороток или ПЦР (HLA)
-Определение генотипов и фенотипов, агглютинацию сывороточных белков, генотипические дефекты иммунной системы.
Все выше приведённые показатели могут дать полноценную оценку функциональной активности иммунной системы. Но в практической деятельности не всегда возможно оценить функцию иммунной системы даже определив все показатели. В связи с чем российские ученные во главе с Р. В. Петровом все методы, используемые для оценки состояния иммунной системы по сложности выполнения разделил на два уровня.
I - уровень – могут быть выполнены в любой клинической иммунологической лаборатории первичного звена здравоохранения, используется для первичного выявления лиц с явной иммунопатологией.
II-уровень оценивает иммунный статус углубленно.