241
НОВАЯ МОДЕЛЬ ТРЕХМЕРНОЙ СТРУКТУРЫ
БЫЧЬЕЙ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ (NP 001008413.2)
А.В. Максименко, Р.Ш. Бибилашвили
Институт экспериментальной кардиологии, Российский Кардиологический НПК,
3-тья Черепковская ул. 15А, 121552 Москва, Россия
alexmak@cardio.ru
Знание трехмерной структуры фермента способствует пониманию механизма катализи-
руемого превращения и способов управления функционированием биокатализатора. Послед-
нее весьма актуально для коррекции нарушений метаболизма. Ликвидация таких нарушений
с помощью ферментных препаратов используется в кардиологии.
Один из применяемых
ферменных агентов – гиалуронидаза (ГУ), регулирующая тканевую проницаемость. Молеку-
ла ГУ состоит их двух доменов – каталитического и домена гомологичного эпидермальному
фактору роста. Ранее в распоряжении исследователей имелась лишь кристаллическая струк-
тура ГУ из пчелиного яда (код PDB: 1FCQ, 1FCU, 1FCV), имеющая 15-29 % идентичных
аминокислотных остатков в гомологичной зоне. По гомологии с пчелиной ГУ строилась 3D
структура бычьей тестикулярной ГУ (БТГ), широко используемой как терапевтическое сред-
ство.
Недавно (Chao K.L., Muthukumar L., Herzberg O.
Biochemistry, 2007, 46, 6911-6920) была по-
лучена кристаллическая
структура ГУ человека, высокогомологичная БТГ (98 % идентичных
аминокислот в гомологичной зоне). Следует заметить, что полных данных о структуре С-конца
ГУ млекопитающих еще пока недостаточно.
Вместе с тем, у ГУ человека
проявляется высокая
консервативность последовательности в области активного центра (33-42 % и выше) и установлен
механизм действия. Особенностью этого фермента является отсутствие образования промежуточ-
ного гликозил-ферментного соединения из-за близкого расположения обычно участвующих в ка-
талитическом превращении двух карбоксильных аминокислотных остатков (Glu/Asp, необходи-
мое удаление ~ 6 Ǻ). Центрами катализа выступают Glu активного центра, как кислотно-основной
катализатор, расщепляющий бета(1-4) гликозидную связь, и карбоксильный кислород (ацетамид-
ный кислород) N-ацетил-D-глюкозаминового
остатка гиалуроновой кислоты,
как нуклеофил,
взаимодействующий с С1 углеродом гиалуронанового субстрата. Проверка установленных меха-
низмов действия и способов регуляции функционирования БТГ в организме требует построения
ее надежной трехмерной структуры, чему способствует определение кристаллической структуры
ГУ человека.
На основе гомологичного моделирования (с использованием трех разных алгоритмов)
была построена трехмерная структура БТГ – продукта гена SPAM1. Оценка качества струк-
турной модели БТГ была проведена с помощью алгоритмов и
серверов Procheck и
WhatCheck/WhatIf. Выравнивание структур осуществлялось с
использованием алгоритма
CLUSTRALx, при локальном моделировании использовали пакет программ Chimera. Всего
было получено шесть структур, пять из которых оказались весьма сходны (RMS менее 12 Ǻ).
Их оптимизация проводилась с помощью программ Amber96, CharMM и Gromos96 в услови-
ях вакуума с диэлектрической константой изотропной среды внутри молекулы 4, а вне моле-
кулы 80 и величине ионной силы среды 0,1 М NaCl. Все Lys и His, экспонированные в рас-
творитель, рассматривались в
протонированной форме, а не
экспонированные на поверх-
ность – в незаряженной. Результирующие структуры, полученные из всех пяти моделей, бы-
ли практически одинаковы (RMS менее 2 Ǻ). Точность полученной структуры БТГ не ниже,
чем качество использованного прототипа (ГУ человека), и позволяет перейти к следующим
этапам анализа регуляции эндогликозидазной активности ГУ в условиях углеводного окру-
жения.
Работа выполнена при частичной финансовой поддержке
Росмедтехнологий и гранта РФФИ 09-04-00023.