Ishning asosiy mazmuni

Ot kashtan urug'larini fitokimyoviy o'rganish

ALS urug'larining ayrim guruhlarining sifatli va miqdoriy tarkibini o'rganish

Adabiyot ma'lumotlari bo'yicha fitokimyoviy tahlil natijalariga ko'ra urug'larda quyidagi ALS guruhlari topilgan: TG (eskin) kumarinlar, polisaxaridlar, mono va disakaridlar, erkin aminokislotalar, lipidlar.

Essin tarkibini ilgari tavsiflangan TLC va HPLC usullaridan foydalangan holda o'rganish amalga oshirildi.

Tizimdagi xromatografiya (xloroform-metanol-suv, 26: 14: 3), silofol yoki sorbfil plastinalarda, so'ngra diazobenzenesulfon kislotasi eritmasi yoki fosfor-volfram kislotasining 20% alkogolli eritmasi bilan ishlov berilganda, shuningdek, xromato-grammni UB nurida uzoq vaqt ko'rish paytida. 366 nm va 254 nm to'lqinlar 0.91 (fraksin) bilan dog'larni ko'rsatadi;

0, 86 (eskulin), 0,4 (rutin)

Ot kashtan urug'larining mono va disakaridlarini aniqlash va miqdorlashtirish tashqi standartlardan foydalangan holda HPLC tomonidan amalga oshirildi. Ot kashtan urug'lari tarkibida fruktoza (0,3%), glyukoza (0,32%) va saxaroza (6,36%); galaktoza, riboza va ksiloza topilmadi (6-rasm).

Shakl 6. Ot kashtan urug'ining HPLC xromatogrammasi mono va disakaridlar 1 - fruktoza, 2 - glyukoza, 3 – saxaroza

Oddiy ot kashtan urug'larining aminokislotalar tarkibi va ushbu guruhining ahamiyati to'g'risida adabiyotda ma'lumot yo'qligi sababli biz merkapto-propion kislotasi (OPA reaktivi) ishtirokida ortofaldegid bilan ustunli derivatsiyalash bilan HPLC tomonidan tarkibiy va miqdoriy amino kislotalar miqdorini o'rganib chiqdik. Hisoblash mutlaq kalibrlash usuli bilan amalga oshiriladi. Quruq xom ashyo nuqtai nazaridan erkin aminokislotalarni tahlil qilish natijalari 7-rasm va 5-jadvalda keltirilgan.

Shunday qilib, 15 ta aminokislotalar topildi, ulardan 5 (metionin, valin, leysin, izoleysin, lizin) inson tanasi uchun ajralmas hisoblanadi. Miqdor tarkibidagi asosiy aminokislotalar trionin, alanin va arginin, aspartik va glutamik kislotalarning yarmi, lizinning yarmiga teng.

Ot kashtan urug'larining lipofil moddalarini o'rganish uchun (40 ± 5) ° С haroratda Sokslet apparatida xom ashyo namunasini (10 g) olish orqali geksan ekstraktsiyasini oldik.

Shakl 7. Oddiy ot kashtanining erkin aminokislotalarining HPLC xromatogrammasi

5-jadval

Oddiy ot kashtan urug'laridagi erkin aminokislotalarning HPLC xromatogrammasini tavsiflash

Geksan ekstraktsiyasi vakuumda bug'lanib, olingan qoldiq (0,61 g) densitometriya va HPLC yordamida tahlil qilindi. Olingan qoldiq yarim quritadigan yog'lar bilan bog'liq, osongina harakatlanuvchi, loyqalangan yashil-sariq suyuqlik bo'lib, uning sinishi indeksi [1.4728] _D^{22 ° C} dir.

Urug'li lipidlarning guruh tarkibi silika gelining qat'iy qatlami bilan Silufol plitalaridagi TLC tomonidan aniqlandi. Plastinka atsetonda fosfor-molibden kislotasining 2% eritmasida oldindan namlanadi. Efir eritmada taxminan 10 mkg lipidlar plastinkaga 10 mm uzunlikdagi tasma shaklida qo'llaniladi. Xromatogramma hal qiluvchi tizimida geksan ishlab chiqaradi: dietil eter: sirka kislotasi - 80: 30: 1,5. Plitalar havoda erituvchilarning hidi yo'qolguncha quritiladi va 80 ° C haroratda majburiy shamollatiladigan idishga joylashtiriladi, bunda alohida lipid guruhlarining ko'k dog'lari sariq fonda paydo bo'ladi. Lipidlarning individual guruhlarini aniqlash xromatogrammada nostandart moddalarning R_f dog'lari bilan taqqoslash orqali amalga oshiriladi.

6-jadval

Ot kashtan urug'larining lipofil moddalarining guruh tarkibi

Lipid guruhlarining nomi	Tarkibi, %
Polar lipidlar	0,7
Sterollar	1,8
Erkin yog' kislotalari	35,7
Triatsilgliserollar	58,5
Sterol efirlari	3,3

Alohida lipid guruhlarini miqdoriy aniqlash “Xromoskan 200” asbobida densitometrik usul bilan amalga oshirildi. Lipidlarning guruh tarkibi 6-jadvalda keltirilgan. Lipidlarning individual guruhlari sonini hisoblash tuzatish omillaridan foydalangan holda ichki normallashtirish usuli bilan amalga oshirildi.

Shakl-8 Ot kashtan urug'larining xromatogrammasi

7-jadval

Oddiy ot kashtan urug'i tarkibi

Yog' kislotasi tarkibi GLC tomonidan aniqlandi. Metil efirlari yog'larni metanol bilan transesterifikatsiya qilish orqali vodorod xloridi ishtirokida olinadi (8-rasm va 7-jadval). Shunday qilib, olein kislotasi (umumiy kislotaning 43,4%), linoleik kislota (umumiy kislotaning 29,7%) va palmitik kislota (10,0 kislotalar miqdoridan%).

Ot kashtan urug'ida mikro va so'l elementlarning mavjudligi va tarkibi aniqlandi va baholandi. Natijada, kul tarkibida kaliy, selen, bor va marganets ustunligi aniqlandi.

Oddiy quruq ekstrakt ot kashtani urug'ini yetishtirish usulini ishlab chiqish

Quruq ekstrakt ishlab chiqarish usulini ishlab chiqish

Ot kashtan urug'lari asosida varikozga qarshi dori-darmonlarni ishlab chiqishda biz quruq ekstrakti olish usulini taklif qildik, chunki LRS ni qayta ishlashning bu usuli eng maqbuldir, bu faol moddalarni maksimal ekstraktsiyasini va standartlashtirilgan o'simlik preparatini yaratish qobiliyatini ta'minlaydi.

Oddiy quruq ekstrakti ot kashtanini olishning texnologik sxemasi (9-rasm) qattiq fazali ekstraktsiya, olingan ekstrakti bug'lanishi, suyuq fazali ekstraktsiya va tozalangan konsentrlangan ekstrakti quritish bosqichlarini ta'minlaydi.

Ekstraktsiya bosqichi uchun maqbul sharoitlarni aniqlash uchun ekstraktorning ta'siri, harorat rejimi, xom ashyoning ekstraktantga nisbati, qazib olish vaqti va chastotasi rentabelligi o'rganib chiqdik. Eksperimental ravishda 70% alkogolni (60 ± 5) ° С gacha bo'lgan ekstrakti sifatida ishlatganda zarracha kattaligi 3: 1 dan 5 mm gacha bo'lgan xom ashyoni uch martalik (har 2 soatda) ekstraktsiya qilish eng maqbul ekanligi aniqlandi. Olingan etil spirti ekstraktlarini butanol (antifoam) qo'shilishi bilan distillash, so'ngra suvli qoldiqni suvli va organik fazalar hajmi 1: 2 nisbatida suvli qoldiqni suv bilan ikki marta ishlov berish va nihoyat, suvli qatlamning suvsizlanishi aniqlandi. Ekstraksiya jarayonining barcha tanlangan parametrlari laboratoriya sharoitida bir qator muvozanat yuklari uchun asos bo'ldi. Tayyor mahsulot va ishlab chiqarish chiqindilarining tahlili (ovqat, lipofil fraksiya) HPLC tomonidan ishlab chiqarilgan eskin yordamida amalga oshirildi.

Shakl 9. Ot kashtan quruq ekstrakti oddiy urug'larini olishning texnologik sxemasi

Yuklab olishlar asosida, ot ekstrakti quruq ekstrakti oddiy urug'larini ishlab chiqarish uchun laboratoriya reglamenti tuzilgan va tasdiqlangan (04868244-02-08).

Quruq ekstraktning fizik xususiyatlarini o'rganish

Tayyor mahsulot - ot kashtan oddiy urug 'quruq ekstrakti o'ziga xos hidga ega bo'lgan amorf gigroskopik sariq-jigarrang kukundir. Quruq ekstraktni texnologik modda sifatida tavsiflash uchun uning texnologik xususiyatlari o'rganildi: quyma massa 0,66 g / sm3, quyma qalinligi 0,83 g / sm3, zichligi - 6,0 g / s, burish burchagi 32 ° .

Biz tomonidan ishlab chiqilgan texnologiya bo'yicha olingan turli xil modellarda o'tkazilgan farmatsevtik tadqiqotlar davomida ot kashtan oddiy urug'i quruq ekstrakti yallig'lanishga qarshi faollikni ko'rsatdi.

Ot oddiy ekstrakti urug'i sifatini nazorat qilish ko'rsatkichlarini ishlab chiqish

ALS quruq ekstraktining sifatli tarkibini o'rganish

TLC va HPLC yordamida quruq ekstrakti tarkibidagi biologik faol moddalarning sifatli tarkibini o'rganishda TG (eskin), flavonoidlar va kumarinlar, mono- va disakaridlar, erkin aminokislotalar mavjudligi aniqlandi.

TLC tomonidan, standart namunalar bilan taqqoslaganda, quruq ekstraktsiyada flavonoidlar (rutin) va kumarinlar (eskulin va fraksin) topilgan.

Quruq ekstraktsiya polisakkaridlarini o'rganish ot kashtan urug'lari uchun ishlatiladigan usullarga muvofiq amalga oshirildi. Yog'ingarchilik reaktsiyasini 96% alkogol ekstrakti suvli eritmasi bilan tahlil qilish ushbu moddalarning ekstraktda amalda yo'qligini ko'rsatdi.

Oddiy mono va disakaridlarning - fruktoza, glyukoza va saxaroza - ot kashtanining mavjudligi va miqdoriy tarkibi xom ashyo tarkibiga o'xshash HPLC tomonidan aniqlandi (10-rasm), uning miqdori 1,48% ni tashkil etdi; Mos ravishda 1,16% va 42,5%.

Quruq ekstraktning aminokislotalar tarkibi urug'lardagi aminokislotalarni tahlil qilish usuli bo'yicha HPLC tomonidan o'rganildi. 15 ta aminokislotalar aniqlandi, ulardan 5 tasi (metionin, valin, leysin, izoleysin, lizin) inson tanasi uchun ajralmas hisoblanadi. Xom ashyoda bo'lgani kabi ekstrakti tarkibida treonin, alanin va arginin ustunlik qiladi (11-rasm va 8-jadval).

Ot kashtan quruq ekstrakti oddiy urug'larini tayyorlashda etil asetat bilan suyuq fazali ekstraktsiyalash natijasida lipofil moddalarni olib tashlash bosqichi ishlatilganligi sababli, bu aralashmalar tayyor ekstraktda ozgina bo'ladi. Ammo GLC tomonidan ekstraktning juda konsentrlangan gekanli eritmasida xom ashyo tarkibida ilgari topilgan 17 ta kislotalarnini aniqlash mumkin edi, ular orasida olein va linolenik kislotalar ustunlik qildi.

Shakl 11. Quruq urug 'ekstraktidagi erkin aminokislotalarning xromatogrammasi

8-jadval

Quruq ot kashtan urug'i ekstrakti tarkibida erkin aminokislotalar mavjudligi

Aminokislota	100 gr quruq ekstraktdagi aminokislotalarning tarkibi
Aspargin kislotasi	1,19
Глутаминовая кислота	1,16
Серин	0,48
Гистидин	0,40
Глицин	0,03
Треонин	1,80
Аланин	2,69
Аргинин	1,89
Тирозин	0,22
Цистин	0,38
Валин	0,46
Метионин	0,07
Изолейцин	0,22
Лейцин	0,21

Tadqiqotlarimizda mikro va so'l elementlarning tarkibi xom ashyo va quruq ekstrakti tarkibida jiddiy farq qilmasligi ko'rsatildi.

Quruq ekstraktni kimyoviy o'rganish shuni ko'rsatdiki, ekstraktning asosiy biologik faol moddalari tarkibi mahalliy xom ashyo tarkibiga o'xshashdir.

Autentifikatsiya mezonlari va faol moddalarni miqdoriy aniqlash usullarini ishlab chiqish

Biz quruq ekstrakti uchun haqiqiylik mezonlarini ishlab chiqdik: sifatli reaktsiya va TG (essin) mavjudligini tasdiqlash uchun TLC. Tadqiqot davomida ekstraktni tahlil qilish uchun shart-sharoitlar tanlandi va undagi essinni miqdoriy aniqlash uchun HPLC usuli ishlab chiqilgan (12-rasm).

Texnika tasdiqlandi. R_s jihatidan aniqlik qabul qilinadigan qiymatlar oralig'ida (0.6-1.2). Noziklik (takrorlanuvchanlik): standart og'ish S (0.86461), nisbiy standart og'ish RS (5.12%). Aniqlik - to'g'ridan-to'g'ri quruq ekstrakti namunasiga essin qo'shimchalari bilan tajribalarda tasdiqlangan tizimli xatoning yo'qligi (9-jadval).

9-jadval

Quruq ekstrakti namunasida essin qo'shilishi bilan tajribalar natijalari

Quruq ekstraktda topilgan essin gr	Qo’shilgan essin gr	Bo’lishi kerak bo’lgan gr	Topildi gr	Nisbiy xato, %
0,0332	0,0128	0,0460	0,0458	-0,44
0,0306	0,0151	0,0457	0,0466	1,93
0,0355	0,0113	0,0468	0,0462	-1,29

Shakl 12. Ot kashtan oddiy urug'i ekstrakti eritmasidan olingan HPLC xromatogrammasi: 1, 2, 3, 4 - 1a essin, Essin Ib, izoessin 1a, izoessin 1b

Essinni miqdoriy tartibini metrologik xususiyatlari 10 ta mustaqil nusxada bitta ekstraktsiya namunasini tahlil qilish asosida hisoblab chiqilgan va 10-jadvalda keltirilgan.

95% ehtimollik bilan bitta aniqlashning nisbiy xatosi ±4,48% ni tashkil qiladi

10-jadval

Oddiy quruq ekstrakti ot kashtanidagi eskinni miqdoriy aniqlash usulining metrologik xususiyatlari

Qo'shimchalar bilan tajriba natijalarining nisbiy xatosi bitta aniqlashning nisbiy xatosidan oshmaydi va ijobiy va manfiy qiymatlar yo'nalishi bo'yicha og'ishlarga ega, bu taklif qilinayotgan tahlil uslubi jarayonida tizimli xato yo'qligini ko'rsatadi. Uslub tekshirish mezonlariga to'liq javob beradi.

Ishlab chiqilgan metodologiyadan foydalanib, laboratoriya sharoitida olingan 5 ta quruq ekstrakti tahlil qilindi. Ekstrakti tarkibidagi essin miqdori: 17,77%; 16.26; 17,89%; 16,91%; 16,64%. Ushbu usul quruq ekstrakti olish uchun LR-ga kiritilgan bo'lib, ushbu ko'rsatkich uchun kamida 15 foiz miqdorni belgilash taklif etiladi. Quruq ekstraktning barqarorligi o'rganildi va ushbu moddaning saqlash muddati taklif qilindi - 2 yil.

Quruq ekstrakt uchun normativ hujjatlarni ishlab chiqish

Tajribalar asosida "Ot kashtan oddiy urug' quruq ekstrakti" FS loyihasi ishlab chiqilgan va quruq ekstrakti uchun standartlashtirishning zamonaviy talablarini hisobga olgan holda ishlab chiqilgan. TS loyihasi quyidagi bo'limlarni o'z ichiga oladi: tavsifi, haqiqiyligi, quritish paytida massaning yo'qolishi, og'ir metallar, mikrobiologik tozaligi, essin va normaning miqdorini aniqlash, qadoqlash, etiketlash, saqlash turi va saqlash muddati.

Xulosa

1. 
   Ot kashtanining maydalangan urug'larining morfologik va anatomik diagnostik xususiyatlari aniqlandi.
   
2. 
   Fizik-kimyoviy tahlil usullari kompleksi yordamida ot kashtan urug'larining sifatli tarkibi o'rganildi. Miqdoriy tahlil natijalariga ko'ra asosiy ALS guruhlarining tarkibi aniqlandi. Polisaxaridlarning tarkibi 41,62%, uglevodlar - 6,98%, aminokislotalar - 0,01%, lipidlar - 6,1%. Iz elementlarining tarkibi o'rganildi.
   
3. 
   Ot kashtan urug'ida HPLC usuli yordamida TG miqdorini aniqlash usuli ishlab chiqilgan. Usulning tasdiqlanishi uning maqsadga muvofiqligini tasdiqladi. Essin tarkibidagi norma kamida 4% ni tashkil qiladi.
   
4. 
   Tadqiqotlar asosida TU 9377-075-04868244-2008 "Ot kashtan oddiy urug'lari" ishlab chiqildi va tasdiqlandi.
   
5. 
   Ekin ekstraktsiyasining asosiy parametrlari barqaror sifat ko'rsatkichlari bilan tayyor mahsulotni olish imkonini berdi. LR 04868244-02-08 ot ekstrakti quruq ekstrakti oddiy urug'larini ishlab chiqarish uchun ishlab chiqildi va tasdiqlandi.